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《rna干擾ercc1基因表達(dá)對(duì)卵巢癌細(xì)胞耐藥的影響》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫(kù)。
1、RNA干擾ERCC1基因表達(dá)對(duì)卵巢癌細(xì)胞耐藥的影響【關(guān)鍵詞】RNA干擾；,,ERCC1基因；,,卵巢癌；,,耐藥 摘要：目的：觀察RNA干擾沉默ERCC1基因?qū)β殉舶┘?xì)胞耐藥的影響。方法：體外合成靶向于ERCC1基因的小干擾RNA(ERCC1-siRNA),用脂質(zhì)體法轉(zhuǎn)染至卵巢癌耐藥細(xì)胞系COC1/DDP,RT-PCR方法檢測(cè)轉(zhuǎn)染前后細(xì)胞內(nèi)ERCC1mRNA的表達(dá)，Westernblot方法檢測(cè)ERCC1基因蛋白表達(dá)的改變，MTT實(shí)驗(yàn)檢測(cè)轉(zhuǎn)染前后COC1/DDP細(xì)胞對(duì)順鉑敏感性的變化。結(jié)果：轉(zhuǎn)染ERCC1-siRNA后，COC1/DDP細(xì)胞中ERCC1基因的mRNA和蛋白表
2、達(dá)均明顯減少。RNA干擾聯(lián)合順鉑用藥能明顯提高COC1/DDP細(xì)胞對(duì)順鉑的敏感性。結(jié)論：RNA干擾ERCC1基因能明顯抑制COC1/DDP細(xì)胞內(nèi)ERCC1基因mRNA和蛋白的表達(dá)，增加COC1/DDP細(xì)胞對(duì)化療藥順鉑的敏感性?！ ￡P(guān)鍵詞：RNA干擾；ERCC1基因；卵巢癌；耐藥 EffectonCytotoxicitybyRNAiERCC1GeneExpressioninOvarianCancerCelILine Abstract：Objective:TostudytheeffectondrugresistancebyRNAimediatedERCC1genesilenc
3、inginovarian10cancercellline.Method:SmallinterferenceRNAtargetedERCC1genewassynthesizedinvitroandwastransfectedintoCOC1/DDPcell．TheexpressionofERCC1wasdetectedbysemi-quantitativereversetranscription-polymerasechainreaction(RT-PCR)andwesternblot.MTTtestwereappliedtomeasuretheinhibitioncombin
4、edwithcisplatinofCOC1/DDPstrain．Result：AftertransfectionofERCC1-siRNA,mRNAandproteinlevelsofERCC1geneinCOC1/DDPcellswereobviouslyreduced；ERCC1genecombinedwithcisplatinincreasesthesensitivitytochemotherapy．Conclusion:ERCC1-siRNAcouldreducetheexpressionofERCC1geneandincreasethesensitivitytoci
5、splatininCOC1/DDPcell. Keywords：RNAi;ERCC1gene;Ovariancancer;Drug-resistance 卵巢癌是婦科最常見(jiàn)的惡性腫瘤，其5年生存率僅為20%～30%。治療的難點(diǎn)為卵巢癌細(xì)胞對(duì)化療藥物―尤其是一線化療藥順鉑產(chǎn)生耐藥性，嚴(yán)重阻斷了化療藥物的抗腫瘤效應(yīng)。ERCC1基因是核苷酸切除修復(fù)(nucleotideexcisionrepair，NER)基因家族成員之一，與卵巢癌化療耐藥密切相關(guān)［1］。ERCC1基因表達(dá)上調(diào)是卵巢癌順鉑耐藥的重要原因。RNA干擾（RNA10interference,RNAi）技術(shù)是近10年出
6、現(xiàn)的一種研究基因功能和進(jìn)行基因治療的一種新方法，是外源雙鏈RNA(double-strandedRNA，dsRNA)分子在mRNA水平沉默靶基因，阻斷基因的表達(dá)［2］。由于RNAi具有序列特異性和高效性，目前已成為抗腫瘤基因治療的有效手段。本研究根據(jù)ERCC1基因高表達(dá)于卵巢癌耐藥細(xì)胞以及RNAi高效特異抑制目的基因的特點(diǎn)，針對(duì)ERCC1基因設(shè)計(jì)合成小干擾RNA（siRNA），在脂質(zhì)體的介導(dǎo)下轉(zhuǎn)染人卵巢癌耐藥細(xì)胞系COC1/DDP，以RT-PCR及Westernblot方法檢測(cè)RNA干擾前后細(xì)胞內(nèi)ERCC1基因mRNA及蛋白表達(dá)水平的改變。采用MTT實(shí)驗(yàn)檢測(cè)RNA干擾ERCC
7、1基因后卵巢癌耐藥細(xì)胞系COC1/DDP對(duì)順鉑敏感性的改變，以探討逆轉(zhuǎn)卵巢癌化療耐藥的新方法。 1材料與方法 1.1材料與試劑：卵巢癌耐藥細(xì)胞株COC1/DDP購(gòu)自中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心。RNA干擾試劑盒購(gòu)自美國(guó)Ambion公司。陽(yáng)離子脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑盒Lipofectamine2000、TrizolRNA提取試劑盒、M-MLV逆轉(zhuǎn)錄試劑盒購(gòu)自Invitrogen公司。RPMI-1640培養(yǎng)基、胎牛血清購(gòu)于GIBCO公司。ERCCI鼠抗人單克隆抗體、羊抗鼠IgG-HRP、Actin(1～19)多克隆抗
