rnai沉默prl1基因?qū)Ψ伟┘?xì)胞侵襲能力的影響

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1、RNAi沉默PRL1基因?qū)Ψ伟┘?xì)胞侵襲能力的影響作者：鐘錫明，范鈺，張瑞佳，鄭金旭【摘要】　　目的：探討RNA干擾(RNAinterference，RNAi)沉默促肝細(xì)胞再生磷酸酶1(phosphataseofregeneratinglivercell1，PRL1)基因?qū)Ψ伟┘?xì)胞侵襲力的影響。方法：應(yīng)用PRL1基因小干擾RNA（smallinterferingRNA，siRNA）轉(zhuǎn)染處理肺癌A549細(xì)胞后，分別采用實(shí)時定量RTPCR和蛋白質(zhì)印跡檢測PRL1基因mRNA和蛋白水平，分別采用軟瓊脂集落培養(yǎng)試驗(yàn)和Boyden小室模型試驗(yàn)檢測癌細(xì)胞的錨著不依賴

2、性增殖和侵襲能力。結(jié)果：與對照組比較，siRNA轉(zhuǎn)染組PRL1mRNA和蛋白水平明顯下調(diào)，且呈濃度和時間依賴性（P<0.05，P<0.05）。體外試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，PRL1siRNA可有效抑制肺癌細(xì)胞集落生長和侵襲能力，且與濃度相關(guān)（P<0.05，P<0.05）。結(jié)論：PRL1基因在肺癌侵襲中起著重要的作用，采用PRL1siRNA轉(zhuǎn)染可抑制肺癌細(xì)胞侵襲?！娟P(guān)鍵詞】肺腫瘤；促肝細(xì)胞再生磷酸酶1；侵襲；RNA干擾；小干擾RNA　?。跘bstract］Objective:Tostudytheeffectsandmechanismofphosp

3、hataseofregeneratinglivercell1（PRL121）smallinterferingRNA（siRNA）oninvasionofhumanlungcancercell.Methods：AfterlungcancercelllineA549weretransfectedbyPRL1siRNA,themRNAandproteinofPRL1weredeterminedbyrealtimeRTPCRandwesternblotassay,respectively.Theanchorageindependentgrowthwasexm

4、inedbyclonformationinsoftagar,andinvasionabilitywasevaluatedbyboydenchambermodel.Results：ThesiRNAcoulddownregulatethelevelofmRNAandproteinofPRL1inadoseandtimedependentmanner.SuppressionofofPRL1expressioncaninhibitinvasionabilityandanchorageindependentgrowthindosedependentmanne

5、rs（P<0.05,P<0.05）.Conclusion：PRL1genemightplayanimportantroleindevelopmentofhumanlungcancer,anddownregulationbyPRL1siRNAcouldinhibitinvasionofhumanlungcancercell.　?。跭eywords］lungcarcinoma；phosphataseofregeneratinglivercell1；invasion；RNAinterference；smallinterferingRNA蛋白酪氨酸磷

6、酸酶(proteintyrosinephosphatase,PTP)在蛋白磷酸化和去磷酸化平衡中起著重要的作用。促肝再生磷酸酶(phosphataseofregenerating12liver,PRLs)是PTP酶家族重要成員之一，該基因家族包括PRL1，PRL2，PRL3三個成員,它們分別定位在6q12,1p35,8q24.3染色體上,彼此之間的同源性高達(dá)76%～85%［1，2］。　　許多實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，PRLs分子能導(dǎo)致細(xì)胞的惡性轉(zhuǎn)化并且增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞的增殖、移動、浸潤和轉(zhuǎn)移能力［3-10］。但目前對PRL1基因在肺癌細(xì)胞侵襲中的研究甚少。本研究借助于R

7、NA干擾（RNAinterference，RNAi）技術(shù)，以合成的PRL1基因小干擾RNA（smallinterferingRNA，siRNA）轉(zhuǎn)染處理肺癌A549細(xì)胞，觀察了PRL1siRNA轉(zhuǎn)染對癌細(xì)胞侵襲力的影響。1材料與方法　　1.1材料　　人肺癌A549細(xì)胞，購自上海生命科學(xué)院。PRL1siRNA序列（5′GAUGCAGUUCAGUUUAUAATT3′和5′UUAUAAACUGAACUGCAUCTT3′），由美國Dharmacon公司合成。PRL1抗體購自SantaCruz公司。Trizol，RNase抑制劑，逆轉(zhuǎn)錄酶SSRTⅡ，Taq

8、酶和轉(zhuǎn)染試劑Oligof