丙泊酚對大鼠缺血再灌注腎nfκb、tnfα表達的影響

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1、丙泊酚對大鼠缺血再灌注腎NFκB、TNFα表達的影響【摘要】目的研究丙泊酚對大鼠肢體缺血再灌注損傷后腎組織中腫瘤壞死因子α(tumornecrosisfactorα，TNFα)、核因子κB(nuclearfactorκB，NFκB)表達的影響。方法24只SD雄性大鼠，隨機分為假手術(shù)對照組(A組)，肢體缺血再灌注組(B組)和丙泊酚干預組(C組)，每組8只。采用免疫組織化學方法檢測TNFα、NFκB的表達，行圖像分析半定量。結(jié)果B組大鼠腎組織中TNFα、NFκB的表達明顯高于A組(P＜0.05)，C組明顯低于B組(P＜0.05)。結(jié)論肢體缺血

2、再灌注后有明顯腎損傷，丙泊酚對肢體缺血再灌注腎損傷有一定程度的保護作用，其機制可能與下調(diào)大鼠肢體缺血再灌注損傷腎組織中TNFα、NFκB的過度表達有關(guān)。　　【關(guān)鍵詞】丙泊酚；腎；肢體缺血再灌注；腫瘤壞死因子α；核因子κB　　肢體缺血再灌注損傷是外科常見的病理生理過程，如止血帶使用時間過長、創(chuàng)傷、斷指再植、血栓再通等都可以引起肢體缺血再灌注損傷。肢體缺血再灌注除了能引起相應(yīng)的肢體損傷，還可以通過神經(jīng)內(nèi)分泌8免疫機制引發(fā)遠隔臟器障礙及損傷。肢體缺血再灌注對相應(yīng)肢體損傷的研究已較成熟，但對于肢體缺血再灌注引起的遠隔臟器腎損傷的研究卻較少見。本研究擬觀察大鼠

3、肢體缺血再灌注后腎組織中腫瘤壞死因子α(tumornecrosisfactorα，TNFα)、核因子κB(nuclearfactorκB，NFκB)的變化以及丙泊酚對其損傷的干預?！　?資料與方法　　1.1動物模型制備實驗前禁食12h，自由飲水，25％烏拉坦(1g/kg)腹腔注射，麻醉后氣管切開，接動物呼吸機機械通氣(通氣頻率為75次/min，潮氣量為8mL，吸呼比為1∶2)，于腹股溝處解剖出雙側(cè)股動脈，用無創(chuàng)動脈夾夾閉，遠端股動脈置管測壓，血壓為零標志缺血成功，保持下肢缺血3h后去除動脈夾再灌注4h，恢復下肢血供，血壓升高標志再灌注成功?！　?.2

4、分組及處理24只清潔級SD雄性大鼠(山西醫(yī)科大學動物中心提供)，體重(200±20)g，隨即分為三組，每組8只。假手術(shù)對照組(A組)：大鼠麻醉后僅分離不夾閉股動脈；肢體缺血再灌注組(B組)：夾閉股動脈缺血3h，再灌注4h；丙泊酚干預組(C組)：夾閉股動脈前10min靜脈注射丙泊酚5mg/kg(AstraZeneca公司，英國)，隨后以10mg/kg·h靜脈輸注，缺血再灌注同B組。再灌注完畢，實驗動物經(jīng)心臟主動脈插管灌注固定液〔4％多聚甲醛0.1mmol/L磷酸緩沖液(phosphatebuffersolution，PBS)配制〕后，處死大鼠取腎，置于10％甲醛溶

5、液中固定24h后常規(guī)石蠟包埋并切片，以備組織學檢查。8　　1.3腎組織TNFα、NFκB的檢測選用鏈酶親和素過氧化物酶復合物即用型免疫組化試劑盒(武漢博士德)，按說明書操作，取石蠟片按程序脫蠟，3％H2O2滅活內(nèi)源性酶，微波抗原修復10min，5％牛血清白蛋白(bovineserumalbumin，BSA)封閉，分別加免抗TNFα多克隆抗體(武漢博士德)I抗、免抗NFκBp65多克隆抗體(武漢博士德)I抗，稀釋度為1∶80，冰箱過夜后加山羊抗鼠免疫球蛋白G，加酶標記物，DAB顯色，光鏡下觀察。應(yīng)用Laica圖像分析系統(tǒng)，光鏡放大400倍攝取圖像，輸入圖

6、像分析系統(tǒng)。每張切片隨機選取60個區(qū)域，計算每張切片的平均光度，陽性單位?！　?.4統(tǒng)計分析計量數(shù)據(jù)以(±s)表示，統(tǒng)計分析采用SPSS12.0行方差分析和q檢驗，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。　　2結(jié)果　　2.1腎組織病理學觀察光鏡下，A組無明顯病理學改變，B組可見腎小球腫大，球囊上皮細胞腫脹，囊壁水腫，囊腔變小。間質(zhì)內(nèi)少量中性白細胞浸潤，血管內(nèi)白細胞聚集，靠邊。C組腫大腎小球明顯減少，囊壁水腫亦減輕，囊腔較B組變大。A組腎組織有較少量的TNFα、NFκB的蛋白表達，B組腎組織中TNFα、NFκB的表達比A組顯著上調(diào)(P＜0.05)，但C組大鼠腎組織

7、中TNFα、NFκB表達明顯低于B組(P＜0.05)(見表1)。光鏡下觀察各組蛋白表達變化，見圖1～4。8　　表1各組大鼠腎組織TNFα、NFκB的表達(略)　　圖1－　圖4略　　3討論　　　　缺血再灌注損傷是常見的病理生理過程，越來越受到重視和研究。肢體缺血再灌注損傷的機理極為復雜：無復流導致一系列細胞結(jié)構(gòu)、功能障礙；鈣超載導致離子交換變化，能量代謝障礙；中性粒細胞活化引發(fā)“呼吸爆發(fā)”，產(chǎn)生并釋放大量自由基和一些促炎癥細胞因子，如NFκB、TNFα等，造成組織損傷和血管通透性增加；以及自由基損傷作用等，從而引起全身炎癥反應(yīng)。TNFα是一種具有多種

8、生物學活性的細胞因子，主