射干麻黃湯對支氣管哮喘大鼠肺組織細(xì)胞因子表達(dá)的影響

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1、射干麻黃湯對支氣管哮喘大鼠肺組織細(xì)胞因子表達(dá)的影響【摘要】目的探討射干麻黃湯對支氣管哮喘大鼠肺組織轉(zhuǎn)化生長因子（TGF）β1表達(dá)的影響方法采用免疫組化、NYD1000型圖像分析軟件半定量測定TGFβ1表達(dá)并對各組大鼠支氣管肺病理組織學(xué)HE染色進(jìn)行觀察及定量分析。結(jié)果射干麻黃湯組支氣管肺病理組織學(xué)指標(biāo)改善優(yōu)于桂龍咳喘寧組(P＜0.01)；TGFβ1表達(dá)明顯低于桂龍咳喘寧組(P＜0.01)。結(jié)論射干麻黃湯可以通過減少TGFβ1表達(dá)減輕炎癥反應(yīng),抑制氣道重塑，對支氣管哮喘起到很好的治療作用。【關(guān)鍵詞】哮喘；射干麻黃湯；嗜酸

2、性粒細(xì)胞；嗜酸性粒細(xì)胞陽離子蛋白；白細(xì)胞介素支氣管哮喘是由嗜酸性粒細(xì)胞(EOS)、肥大細(xì)胞和淋巴細(xì)胞等多種炎癥細(xì)胞參與的慢性氣道炎癥。研究發(fā)現(xiàn),轉(zhuǎn)化生長因子β1(TGFβ1)在氣道重塑的過程中起著重要的作用,可誘導(dǎo)成纖維細(xì)胞向肌成纖維母細(xì)胞轉(zhuǎn)化,促進(jìn)氣道膠原沉積和基底膜增厚〔1〕。本文觀察了中藥射干麻黃湯對支氣管哮喘大鼠肺組織TGFβ1表達(dá)的影響。　　1材料與方法　　1.1藥物試劑5射干麻黃湯由射干、麻黃、生姜、細(xì)辛、紫菀、款冬花、五味子、大棗、半夏組成,由我院中藥房提供。卵蛋白:美國Sigma公司生產(chǎn)。氫氧化鋁:天津市化

3、學(xué)試劑三廠生產(chǎn),分析純化?！　?.2動物分組及給藥清潔級SD大鼠(哈爾濱醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心提供)32只，隨機(jī)分為4組,即正常組、模型組、射干麻黃湯組、桂龍咳喘寧膠囊對照組(桂龍咳喘寧組),每組8只。各治療組均從第1次哮喘激發(fā)開始(造模第3周)至處死前每天灌胃給藥(劑量見表1),正常組、模型組予0.5%的羧甲基纖維素鈉溶液灌胃,每日1次,連續(xù)4w?！　?.3模型建立除正常組外，各組大鼠腹腔內(nèi)注射10%卵蛋白和10%氫氧化鋁混合液1ml,致敏后第15天用1%卵蛋白噴霧激發(fā)大鼠哮喘發(fā)作,隔日1次,每次20min,共激發(fā)4w〔2〕。大

4、鼠出現(xiàn)呼吸加快、口唇發(fā)紺、腹肌痙攣、點(diǎn)頭呼吸及站立不穩(wěn)等表現(xiàn)為激發(fā)成功。正常組以生理鹽水腹腔注射及霧化吸入?！　?.4檢測指標(biāo)及方法取麻醉后動物肺中葉甲醛固定，脫水、包埋、切片,分別做HE染色。光鏡下觀察，參照文獻(xiàn)測量大鼠氣道壁的面積，并用氣管內(nèi)周長進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化。采用NYD1000型圖像分析軟件測定完整支氣管管腔的內(nèi)周長(Pi)、管壁面積(WA)、支氣管平滑肌的面積，用Pi進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化，分別以WA/Pi、支氣管平滑肌的面積/Pi表示支氣管管壁厚度、支氣管平滑肌厚度；同時(shí)測定每高倍視野(400倍)的EOS、淋巴細(xì)胞數(shù)。采用免疫組化半定

5、量測定TGFβ51表達(dá),石蠟切片常規(guī)脫蠟脫水,微波抗原修復(fù),過氧化氫甲醇溶液滅活內(nèi)源性過氧化物酶,滴加正常山羊封閉液,室溫30min,各組分別滴加1∶80配置的兔IgG多抗,4℃過夜,磷酸鹽緩沖液(PBS)洗凈后,滴加生物素標(biāo)記的二抗工作液,37℃反應(yīng)20min,PBS洗凈后加辣根酶標(biāo)記的鏈酶卵白工作液,37℃反應(yīng)20min,PBS洗5min，共4次,室溫顯色,鏡下控制反應(yīng)時(shí)間約10min左右,洗凈后蘇木精復(fù)染,樹膠封片。計(jì)算機(jī)圖像處理軟件半定量測定TGFβ1表達(dá)(以染色吸光度值表示)?！　?.5統(tǒng)計(jì)學(xué)分析采用SPSS11.

6、5軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理,統(tǒng)計(jì)方法用單因素方差分析。　　2結(jié)果　　正常組大鼠肺組織偶見炎細(xì)胞浸潤，管壁完整，黏膜未見充血水腫，管壁和平滑肌厚度正常。與正常組比較，模型組大鼠可見支氣管壁及血管、支氣管周圍有大量EOS、淋巴細(xì)胞等炎性細(xì)胞浸潤(P＜0.01),支氣管黏膜水腫、增厚、上皮脫落、微血管滲漏、管腔內(nèi)分泌物增多,基層細(xì)胞增生、平滑肌增厚(P＜0.01),肺泡間隔變寬。與模型組比較,各治療組EOS、淋巴細(xì)胞等炎性細(xì)胞浸潤明顯減少(P＜0.01),肺組織充血、水腫現(xiàn)象減輕,管壁和平滑肌厚度明顯減少(P＜0.01),肺泡腔較寬,肺泡間隔

7、較窄；射干麻黃湯組病理組織學(xué)指標(biāo)改善優(yōu)于桂龍咳喘寧組(P＜0.01)，見表1?！　∧Ｐ徒M大鼠肺組織中TGFβ1表達(dá)（247.0±518.6）明顯高于正常組(143.4±18.9)(P＜0.01),與模型組比較,射干麻黃湯組（163.2±19.1）及桂龍咳喘寧組（211.1±28.2）TGFβ1表達(dá)均降低(P＜0.01,P＜0.05),并且，射干麻黃湯組TGFβ1表達(dá)明顯低于桂龍咳喘寧組（P＜0.01)?！　”?各組大鼠病理組織學(xué)指標(biāo)的比較（略）　　與模型組比較:1）P＜0.01;與桂龍咳喘寧組比較:2）P＜0.01　　3討

8、論　　TGFβ1是TGFβ超家族中的一員,主要存在哺乳動物的肺、腎及胎盤組織中,肺組織的TGFβ1主要由氣道上皮細(xì)胞、成纖維細(xì)胞及EOS產(chǎn)生〔3，4〕。研究表明,氣道中TGFβ1表達(dá)增高可刺激氣道平滑肌細(xì)胞分裂與增殖,促進(jìn)氣道平滑肌細(xì)胞產(chǎn)生IL8及前列