原發(fā)性高血壓患者外周血單核細(xì)胞趨化因子1基因表達(dá)及意義

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1、原發(fā)性高血壓患者外周血單核細(xì)胞趨化因子1基因表達(dá)及意義【摘要】目的：觀察原發(fā)性高血壓（EH）患者外周血單核細(xì)胞趨化因1（MCP1）基因表達(dá)，探討其與EH的關(guān)系及意義。方法:用酶聯(lián)免疫吸附（ELISA）法測(cè)定62例EH患者和30例正常對(duì)照者外周血MCP1蛋白含量，用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（RTPCR）法檢測(cè)外周血單個(gè)核細(xì)胞中MCP1mRNA表達(dá)。結(jié)果：與對(duì)照組比較，EH組外周血MCP1蛋白含量及外周血單個(gè)核細(xì)胞MCP1mRNA表達(dá)均顯著增高（P<0.01）。結(jié)論：(1)MCP1可能參與了EH的病理生理過(guò)程；(2)外周血單個(gè)核細(xì)胞的MCP1mRNA表達(dá)上調(diào)可能是EH患者

2、外周血MCP1蛋白含量增高的機(jī)制之一?！娟P(guān)鍵詞】高血壓趨化因子單核細(xì)胞基因表達(dá)逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定原發(fā)性高血壓（essential8hypertension，EH）是常見(jiàn)的心血管疾病，也是導(dǎo)致心腦血管疾病的重要危險(xiǎn)因素。近年來(lái)，越來(lái)越多的學(xué)者認(rèn)為EH是一種與遺傳、環(huán)境、代謝極為相關(guān)的復(fù)雜疾病[1～3]，當(dāng)EH與其他相關(guān)危險(xiǎn)因素并存時(shí)，單純的血壓控制只能使不到60%的患者獲益，而危險(xiǎn)因素的干預(yù)才能獲得更大的益處。因此，積極探討EH的發(fā)病機(jī)制及其影響因素，對(duì)更有效的控制EH，減輕其危害已成為醫(yī)務(wù)工作者的共識(shí)。有學(xué)者研究發(fā)現(xiàn)，炎癥可能在EH的發(fā)病機(jī)制中起著重要的作用[4]，20

3、07年2月～12月實(shí)驗(yàn)檢測(cè)EH患者外周血單核細(xì)胞趨化因子1（monocytechemotacticprotein1，MCP1）蛋白水平及單個(gè)核細(xì)胞MCP1mRNA的表達(dá)，探討外周血MCP1的變化與EH的關(guān)系。1對(duì)象與方法1.1對(duì)象及分組　　按《中國(guó)高血壓防治指南（2005年修訂版）》[5]制定的標(biāo)準(zhǔn)，選取心血管科住院和門(mén)診新診斷或未經(jīng)正規(guī)降壓治療的EH患者62例，同時(shí)選取血壓正常的30例健康體檢者作為對(duì)照組。排除繼發(fā)性高血壓、血栓出血性疾病、糖尿病、高脂血癥、感染、嚴(yán)重肝腎疾病、自身免疫性疾病及腫瘤性疾病，排除近期有手術(shù)或外傷史等影響MCP1的因素。1.2方法1.2.1主要試

4、劑和儀器人淋巴細(xì)胞分離液（上海捷瑞），Trizol試劑（美國(guó)Invitrogen），焦炭酸二乙酯（瑞興），逆轉(zhuǎn)錄試劑盒（Promega），PCR試劑盒（Promega），100bpDNALadderMarker、D2000DNAMarker（天根生化），人MCP1ELISA8試劑盒（美國(guó)R＆D公司）；ULT13863三洋-80℃低溫冰箱(日本)，5745臺(tái)式冷凍離心機(jī)(德國(guó))，Eppendorffcentrifuge5810R高速離心機(jī)，Amersham核酸蛋白分析儀，PCR儀（PEgeneAmpPCRSystem2400）（PerkinElmer），DNA成像分析儀（GelDoc

5、EQ，BioRad），酶標(biāo)儀（ELx800，BioTek公司）。MCP1引物設(shè)計(jì)由上海生工合成，上游引物5'AGGAAGATCTCAGTGCAGAGG3'，下游引物5'–AGTCTTCGGAGTTTGGGTTTG3'；βaction：上游引物5'AGCGAGCATCCCCCAAAGTT3'，下游引物5'GGGCACGAAGGCTCATCATT3'。1.2.2標(biāo)本采集受檢者空腹12h，于次日清晨6∶00～7∶00采集肘正中靜脈血8ml，其中4ml置普通生化管中，室溫靜置2h，自然凝固后予離心10min，1000r/min收集上清液置于-80℃冰箱保存待測(cè)；另4ml置于

6、EDTA抗凝試管中搖勻后即刻置40℃冰箱冷存，于6h內(nèi)提取RNA用。1.2.3外周血MCP1蛋白含量測(cè)定用保存待測(cè)的血清，依照MCP1ELISA試劑盒說(shuō)明書(shū)的步驟操作。用酶標(biāo)儀檢測(cè)450nm波長(zhǎng)下各孔吸光度，根據(jù)吸光度值計(jì)算標(biāo)本中MCP1的濃度。1.2.4人血單個(gè)核細(xì)胞中RNA提取和逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（RTPCR）8淋巴細(xì)胞分離液提取外周血中單個(gè)核細(xì)胞后，按照說(shuō)明書(shū)的步驟提取總RNA；按逆轉(zhuǎn)錄試劑盒說(shuō)明書(shū)步驟合成cDNA，并用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的片段，PCR產(chǎn)物用1.5%瓊脂糖凝膠跑電泳，溴乙錠顯色。測(cè)定各條帶灰度值，以βactin為內(nèi)參，用MCP1與βactin的灰度比值

7、定量MCP1。1.2.5統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS11.5統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析處理，數(shù)據(jù)以（x±s）表示，組間比較采用t檢驗(yàn)，P＜0.05為差異顯著，P＜0.01為差異極顯著。2結(jié)果2.1一般資料EH組及對(duì)照組的一般資料見(jiàn)表1。兩組研究對(duì)象的年齡、性別、總膽固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白、高密度脂蛋白、總膽固醇、空腹血糖和外周血白細(xì)胞比較，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。表1EH組及對(duì)照組的基本資料注：TC示總膽固醇，TG示甘油三酯，F(xiàn)BG示空腹血糖，L