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1、、目的與要求1、學習并掌握臨時裝片的制作方法和步驟。2、學習徒手切片技術。3、了解細胞基本結構和厚角組織的特點。二、材料和用品1、自備材料:解剖器(鑷子、解剖針、單面刀片或雙面刀片);洋蔥鱗莖、青紅椒、芹菜葉柄、女貞葉片或其它植物的葉片、胡蘿卜塊等。2、其它材料和用品:顯微鏡、蓋玻片、載玻片、紗布、蒸餾水、吸水紙、10%甘油水溶液、50%甘油水溶液、純甘油、碘—碘化鉀稀溶液、培養(yǎng)皿、吸管。三、實驗內容???1、臨時裝片的制作方法???2、徒手切片方法四、實驗方法要觀察、研究植物細胞、組織和器官的微細結構,以及一些很微小的藻、菌植物等,這些用肉眼是無法看到的,必須借助
2、于顯微鏡來觀察,要用顯微鏡觀察,首先必須制成各種制片,放在顯微鏡下才能觀察。制片的方法很多,這里著重介紹臨時裝片法和徒手切片的方法技術。1、臨時裝片的制作方法臨時裝片法是用少量的新鮮植物材料,如單個細胞、薄的表皮或切成的薄片以及其它小的或扁平的材料(如絲狀或葉狀的藻類、菌類、蕨類的原葉體和孢子囊、纖細的苔蘚植物等等),把這些材料放在載玻片的水滴中,再蓋上蓋玻片做成玻片標本的方法。這種方法制成的標本,可以保持材料的生活狀態(tài)和天然的色彩。此法一般多做為臨時觀察使用,也可根據需要選擇適宜的染料染色,制成永久制片或用某些化學試劑作組織化學反應。???臨時裝片的制作方法和步驟
3、如下:(1)清潔玻片:將蓋玻片和載玻片用清水洗凈,再用紗布擦干,擦玻片時用左手食指和拇指夾住玻片的兩邊,右手食指和拇指包住紗布,同時擦到的玻片的兩面,用力要均勻。注意:由于蓋玻片很薄,所以擦蓋玻片時要特別小心,用力要輕,右手食指和拇指要輕輕捻動,以免把蓋玻片捏破。(2)放置材料:先將載玻片平放在桌面上,于載玻片中央滴一滴蒸餾水或稀甘油,然后用鑷子鑷取或吸管吸取少量要觀察的材料(如洋蔥鱗葉表皮或水綿……),放在載玻片中央的水滴或甘油中,再用鑷子和解剖針將材料展平或分散開,勿使材料折疊或干燥。(3)加蓋玻片及其它處理:為了避免產生氣泡,蓋蓋玻片時,應該以大拇指和食指拿著
4、蓋玻片的兩個角或用鑷子夾住其一端,使蓋玻片的一邊先與載玻片上的水滴邊緣接觸,而后徐徐放下另一邊,當蓋玻片被夾持的一邊將貼近載玻片時,則可放手或抽出鑷子,使其自然輕輕復蓋,這樣可以使蓋玻片下的空氣擠出,免生氣泡。注意載玻片中央的液滴要適中,既要使其充滿蓋玻片,又要不會使蓋玻片浮動或使液滴從蓋片下外溢,假如水不夠,可用吸管小心地從蓋玻片的邊上再滴入一小滴水,使它和蓋玻片下面的水相接觸;如果水太多,溢出蓋玻片,則可用吸水紙吸去,蓋玻片的上面,一定不能被水浸濕,如果發(fā)生這種情況,應該小心地取下蓋玻片,擦干以后,再按上述方法重新蓋上。這樣做好的裝片,便可在顯微鏡下進行觀察。根
5、據需要,臨時水裝片做好后還可以進行簡單的染色(例如用碘—碘化鉀或番紅等來染色),其方法是直接在蓋玻片的一側加一滴染液,用吸水紙條在蓋玻片的另一側吸水,引入染液,以使蓋片下的材料染上色。注意:臨時裝片根據需要可以水封片或以甘油封片,凡用以臨時觀察,不欲久留的裝片均可用水封片,制成水裝片;需要提前半天或一天就備出的裝片或者觀察后須保留一定時間的裝片,為防止水分蒸發(fā),出現(xiàn)材料收縮現(xiàn)象,則適宜用甘油封片,制成甘油封片,用甘油封片時,保留時間短者,可用10%甘油水溶液,保留時間長者則須從10%甘油中再轉入50%甘油水溶液中或在此液中浸一小時后再轉入純甘油中封片。用甘油做臨時裝
6、片的優(yōu)點是不僅封片保留時間長,且有加強材料透明的作用。本實驗以洋蔥(或大蔥)鱗莖內表皮為材料,通過撕皮法做臨時裝片,用碘—碘化鉀做染色劑,在觀察做片效果時同時了解細胞的基本結構,如細胞壁、細胞質、液泡、細胞核等。2、徒手切片法徒手切片法簡稱手切片法,即手拿刀片將材料切成能在顯微鏡下觀察其內部結構的薄片的方法。是植物形態(tài)解剖學實驗及研究中最簡單和最常用的方法,也是最重要的基本技能之一。徒手切片的材料一般是新鮮的,有時也可用預先固定好的。這種切片方法雖然有其缺點,如:不易做到將整個切面切得薄而完整,往往切出的片子厚薄不一;過軟過硬的材料比較難切。但其優(yōu)點很多,如:工具簡
7、單,只要有一把鋒利的剃刀或雙面刀片就夠了;方法簡便,容易學會;節(jié)省時間,只要有現(xiàn)成材料,可以立刻用刀片切成薄片,當即觀察,即便要染色,時間也不長;還有一個獨特的優(yōu)點就是可以看到組織細胞內的自然結構和天然顏色。??徒手切片的方法見圖2—2。一般材料的徒手切片方法(1)將材料切成長約2~3厘米的小段,削平切面。(2)左手大拇指和食指的第一關節(jié)指彎夾住材料,使之固定不動搖。為防止刀傷,拇指應略低于食指,并使材料上端超出手指2~3毫米,不可高出過多,否則切片時材料容易動搖,也不容易切薄。(3)右手大拇指和食指捏住刀片的右下角(刀片要非常鋒利,雙面刀片必須是新用的),刀口