血漿脂蛋白瓊脂糖電泳課件

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1、血清脂蛋白瓊脂糖凝膠電泳【目的】掌握脂蛋白的分類及其代謝特點(diǎn)。掌握脂蛋白的瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)的原理，熟悉其方法。12瓊脂糖鏈依分子內(nèi)和分子間氫鍵及其它力的作用使其互相盤繞形成繩狀瓊脂糖束，構(gòu)成大網(wǎng)孔型凝膠。D-半乳糖3,6-脫水-L-半乳糖瓊脂糖（agarose）【原理】34血清脂蛋白經(jīng)飽和蘇丹黑B預(yù)染后，以瓊脂糖凝膠為支持介質(zhì)，在pH8.6巴比妥緩沖液中電泳，根據(jù)各脂蛋白的組成、大小、形狀分離成不同區(qū)帶。【原理】5血清脂蛋白(lipoprotein)的組成6分類1.按電泳法分+β前βα血清脂蛋白瓊脂糖凝膠電泳圖譜乳糜微粒按其移動(dòng)的

2、快慢，可將脂蛋白依次分為：α-脂蛋白、前β-脂蛋白、β-脂蛋白，乳糜微粒在原點(diǎn)不動(dòng)。72.按超速離心法分乳糜微粒(CM)極低密度脂蛋白(VLDL)低密度脂蛋白(LDL)高密度脂蛋白(HDL)密度顆粒8（三）結(jié)構(gòu)特征CMVLDL(前β)LDL(β）HDL（α）甘油三脂膽固醇蛋白質(zhì)帶電量（Q）pH8.6為例顆粒大?。╩m）密度電泳速度形態(tài)多多少少大低慢規(guī)則不規(guī)則少少多多小高快9pH8.6>pI，各種脂蛋白均帶負(fù)電，電泳時(shí)由負(fù)極到正極；VLDL為圓形，受阻力小，LDL形態(tài)不規(guī)則，受阻力大，所以VLDL跑在前。加樣槽β前βαCMLDLVLD

3、LHDL—+10【試劑與器材】1.人血清（預(yù)染）2.微量加樣器3.電泳儀、電泳槽4.瓊脂糖5.巴比妥緩沖液（pH8.6）11【操作】血清預(yù)染制膠適量瓊脂糖適量緩沖液瓊脂糖膠溶液Δ12123440mL點(diǎn)樣孔朝負(fù)極–+去封口膠布13血清預(yù)染制膠點(diǎn)樣3倒上緩沖液，使其恰好沒過點(diǎn)樣孔。14血清預(yù)染制膠點(diǎn)樣預(yù)染色的標(biāo)本（15μL）3倒上緩沖液，使其恰好沒過點(diǎn)樣孔。小心?。?！點(diǎn)樣孔不要戳破15血清預(yù)染制膠點(diǎn)樣電泳80－100V，20－30min,負(fù)極向正極1617制膠時(shí)，要注意梳子的低部要距制膠板1mm以上。(2)凝膠冷卻時(shí)要水平放置，完全凝固

4、后才能使用。(3)點(diǎn)樣時(shí)要小心，不要戳穿點(diǎn)樣孔。(4)點(diǎn)加樣品時(shí)，要緩緩加入，不能太快，否則樣品容易外溢。(5)樣品點(diǎn)于電泳槽負(fù)極。(6)吸取預(yù)染血清時(shí)，應(yīng)吸取上層，下層或管底可能有染料顆粒沉渣。操作注意事項(xiàng)：1819臨床應(yīng)用：高脂蛋白血癥的分型CMβ前βα正常Ⅰ型Ⅱa型Ⅱb型Ⅲ型Ⅳ型Ⅴ型20思考題1.影響電泳遷移率的因素有哪些？2.試述瓊脂糖凝膠電泳分離脂蛋白的原理。