殼聚糖載體固定化高效亞油酸異構酶及其酶學特性的研究

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1、殼聚糖載體固定化高效亞油酸異構酶及其酶學特性的研究ZJNSF浙江省自然科學基金申請書(2005版)浙江省自然科學基金申請書浙江省自然科學基金委員會二OO五年制申請書版本號：73089175ZJNSF浙江省自然科學基金申請書(2005版)基本信息申請書版本號：73089175ZJNSF浙江省自然科學基金申請書(2005版)項目組主要成員說明：1.個人介紹部分申請者必須填寫，其他人員可以不填寫；2.高級、中級、初級、博士后、博士生、碩士生及參加單位數(shù)由申請者負責填報，總人數(shù)自動生成；3.第一人必須是申請者，信息從前面自動讀入，但每年工作時間必須手工錄入。申請書版本號：7308

2、9175ZJNSF浙江省自然科學基金申請書（2005版）個人介紹：申請書版本號：73089175ZJNSF浙江省自然科學基金申請書（2005版）申請書版本號：73089175ZJNSF浙江省自然科學基金申請書（2005版）申請經(jīng)費預算6.0萬元注：開支范圍和標準參見《浙江省省級科技項目經(jīng)費管理暫行辦法》（浙財教字[2002]20號）。申請書版本號：73089175ZJNSF浙江省自然科學基金申請書（2005版）申請者承諾：我保證：（1）申請書內(nèi)容是真實的；（2）恪守科學道德，倫理道德的基本原則；（3）項目組成員知曉申請書內(nèi)容，并自愿參與研究工作；（4）已如實填報申請者正在

3、主持的國家和省部資助經(jīng)費在20萬元及以上的研究項目名稱、來源和研究期限；（5）如果獲得資助，我將履行項目負責人職責，嚴格遵守浙江省自然科學基金委員會的有關規(guī)定，切實保證研究工作時間，認真開展工作，按時報送有關材料。若填報失實或違反規(guī)定，本人將承擔全部責任。簽字：日期：項目依托單位承諾:已按規(guī)定對申請人的資格和申請書內(nèi)容進行了審核。申請項目如獲資助，我單位保證對計劃實施所需要的人力、物力和工作時間等條件給予保障，嚴格遵守浙江省自然科學基金委員會有關規(guī)定，督促項目組遵守科學道德和倫理道德的基本原則，督促項目負責人和本單位項目管理部門按照規(guī)定及時報送有關材料。依托單位公章日期.

4、申請書版本號：73089175ZJNSF浙江省自然科學基金申請書（2005版）1.課題研究意義共軛亞油酸（conjugatedlinoleicacid，CLA）是亞油酸（linoleicacid，LA）位置和幾何異構體，是一組不飽和鍵位置（c8,c10;c9,c11;c10,c12;c11,c13）和幾何（cis,cis;cis,trans;trans,cis;trans,trans）異構體的18碳共軛二烯脂肪酸的統(tǒng)稱[1]。1986年首次發(fā)現(xiàn)CLA可抑制皮膚癌[2]，隨后又發(fā)現(xiàn)其許多重要生理作用：抗癌；抗氧化；降低膽固醇；促生長因子；抑制脂肪積累；防治糖尿??；抗粥狀動脈

5、硬化；改善骨組織代謝；提高飼料效價；防霉等[3，4]。目前，人體必需脂肪酸CLA在醫(yī)藥保健、食品、飼料等方面的應用潛力受到越來越多的關注[5]。上海大學正在進行一項“CLA作為國家二類新藥的研究”的課題研究。世界上CLA的工業(yè)化生產(chǎn)現(xiàn)在均采用化學法。常用的為堿性異構化方法[6-7]：把含LA的原料溶解于有機溶劑中，在氮氣保護、加熱及強堿存在下使LA異構化為CLA。此法優(yōu)點是工藝較簡單，轉化率可達80%以上；缺點是得到一系列具有位置和幾何異構的CLA混合物，還存在著環(huán)化等副反應，并且產(chǎn)生大量的廢水和廢氣，對環(huán)境的壓力很大，難以持續(xù)發(fā)展。自然界中許多生物具有轉化不飽和脂肪酸的

6、能力，國內(nèi)外已有多家科研教學機構競相開展此方面的研究[8-9]，其中嗜酸乳桿菌（Lactobacillusacidophilus）具有較高的將LA轉化為CLA的異構化酶的生物活性，該LA異構酶為胞內(nèi)酶[10]。目前該原始菌株發(fā)酵液中CLA生成量最高為300μg〃ml-1，即CLA最高含量約為0.03%（w/w）[11]。迄今，對嗜酸乳桿菌的生物轉化的作用機制及提高CLA產(chǎn)量的影響因素缺乏系統(tǒng)研究，難以指導生產(chǎn)和從本質(zhì)上提高CLA的生產(chǎn)能力。微生物發(fā)酵法生產(chǎn)CLA，在發(fā)酵液中CLA含量太低，且要用大量的有機溶劑將CLA從水溶性的發(fā)酵液萃取出來，再經(jīng)過分離、提純等許多下游工序

7、，生產(chǎn)成本高，對環(huán)境的壓力很大。本課題針對上述特點，將嗜酸乳桿菌菌絲中的CLA高效異構酶分離、純化，用無毒、堆積密度小、比表面大的殼聚糖(由蝦殼/蠶蛹皮制得)作為載體將該酶固定化后，在無溶劑體系中直接將LA轉化為CLA。本研究的目標為酶法清潔化生產(chǎn)富含CLA的植物油。含70-85%CLA的葵花籽油膠囊美國市場價為每盒15.50美元(規(guī)格:30粒/盒;每粒含CLA600毫克)；在歐洲市場，其同樣規(guī)格的CLA產(chǎn)品價格為13-16歐元。本課題成果具有能將植物油增值幾百倍的潛力。21世紀的浙江省生物醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)將伴隨知識經(jīng)濟的崛起而成為令