4.28標(biāo)本溶血對(duì)乙肝表面抗原檢測(cè)的影響

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1、本文檔由www.yxt1101.com云軒亭論文網(wǎng)整理提供！溶血對(duì)乙型肝炎表面抗原檢測(cè)的影響乙型肝炎表面抗原的檢測(cè)是診斷乙肝的主要指標(biāo)，隨著檢驗(yàn)技術(shù)的不斷發(fā)展酶聯(lián)免疫法因其簡(jiǎn)便，靈敏度高，特異性強(qiáng)，不需要特殊設(shè)備的特點(diǎn)，而被廣泛應(yīng)用[1]。溶血是臨床檢驗(yàn)中最常見(jiàn)的一種干擾和影響因素[2]。除常見(jiàn)的紅細(xì)胞破壞外，血小板、白細(xì)胞等血細(xì)胞破壞釋放的某些胞內(nèi)成分也可干擾或影響臨床檢驗(yàn)結(jié)果的判定。由于各種原因造成的溶血，非特異性物質(zhì)對(duì)試驗(yàn)造成影響，致使檢驗(yàn)結(jié)果出現(xiàn)假陽(yáng)性，現(xiàn)分析如下1資料與方法1．1一般資料14例乙肝患者檢查，86例健康人體檢。1．2試劑乙型肝炎病毒表面抗

2、原診斷試劑盒(酶聯(lián)免疫法ELISA)，上海科華生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)。1．3方法1．3．1溶血血清制備，將待測(cè)血清放置于低溫冰箱(-40℃)內(nèi)凍20min后,取出融化,以3000r/min離心10min，分離溶血血清。溶血和不溶血各1份。從冰箱取出試劑盒室溫放置30min，微孔反應(yīng)條中每孔加入待測(cè)標(biāo)本50μL，設(shè)陰陽(yáng)性對(duì)照各2孔，每孔加入陰性對(duì)照(或陽(yáng)性對(duì)照)各1滴,并設(shè)空白對(duì)照1孔。然后每孔加入酶結(jié)合物1滴(空白對(duì)照除外)，充分混勻，封板，置37℃避光孵育30min，棄孔內(nèi)液體，洗板5次后拍干。每孔加顯色劑A和B各1滴，充分混勻，封板，置37℃避光孵育15min

3、,目測(cè)比色，肉眼判斷結(jié)果：顯藍(lán)色為陽(yáng)㈩，無(wú)色為陰性㈠。1．3．2最后結(jié)果應(yīng)用統(tǒng)計(jì)軟件SPSS13.0進(jìn)行分析。2結(jié)果2．114例溶血和不溶血乙型肝炎陽(yáng)性結(jié)果完全一致。2．268例溶血和不溶血乙型肝炎表面抗原陰性結(jié)果完全一致。2．318例溶血雨不溶血乙型肝炎表面抗原結(jié)果不一致，出現(xiàn)假陽(yáng)性。經(jīng)二步法：從冰箱取出試劑盒室溫放置30min。微孔的反映條件中各加入50μL待測(cè)液，并分陰陽(yáng)性對(duì)照各2孔，每孔加入陰性對(duì)照或陽(yáng)性對(duì)照，各一滴，并設(shè)空白對(duì)照1孔，37℃避光孵育30min，棄空內(nèi)液體、洗版5次拍干，每孔加酶結(jié)合物1滴（空白組除外），充分混勻，封板，然后在37℃避光孵

4、育30min本文檔由www.yxt1101.com云軒亭論文網(wǎng)整理提供！，棄空內(nèi)液體，洗版5次，拍干，加顯色劑A和B各一滴，充分混勻，封板，然后在37℃避光孵育15min,目測(cè)比色并判斷結(jié)果：HbsAg顯藍(lán)色為陽(yáng)性，無(wú)色為陰性，結(jié)果均為陰性。結(jié)果經(jīng)SPSS13.0分析，見(jiàn)表1：表1血液標(biāo)本ELISA檢測(cè)結(jié)果分析檢測(cè)結(jié)果乙肝患者（人）健康人（人）溶血不溶血溶血不溶血陽(yáng)性（﹢）1414180陰性（﹣）006886F--1284.44P--0．0002．4溶血對(duì)陰性標(biāo)本檢測(cè)易出現(xiàn)假陽(yáng)性，陽(yáng)性標(biāo)本無(wú)影響。3討論3．1引起溶血的常見(jiàn)原因及對(duì)策：采血時(shí)發(fā)生的溶血：1注射器和

5、容器不干燥，不清潔；2注射器與針頭連接不好；3壓脈帶捆扎時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，淤血過(guò)久[3]；4抽血消毒時(shí)酒精未干就進(jìn)行抽血；5穿刺不順利損傷組織過(guò)多；6抽血速度過(guò)快針尖在靜脈中探來(lái)探去；7血液注入容器中時(shí)未取下針頭，或用力推出產(chǎn)生大量氣泡；8在有血腫的地方采集血樣；9滲透壓的改變；10為了盡快分離血清，用竹簽攪拌不當(dāng)引起的溶血等；11用干燥管采血等。病人自身的因素；1病人自身有溶血性疾病；2由于病人嚴(yán)重脫水、低血容量休克等原因?qū)е麓┐汤щy造成的溶血。弄清楚了溶血的常見(jiàn)原因，在臨床上，我們就要積極的避免這些因素的發(fā)生，定位準(zhǔn)確因素，對(duì)癥下藥，規(guī)范要求，熟練操作，避免人為因素

6、導(dǎo)致溶血的發(fā)生，從而使檢測(cè)更加的準(zhǔn)確。3．2溶血標(biāo)本采用酶聯(lián)免疫法（ELISA）檢測(cè)乙型肝炎表面抗原易出現(xiàn)假陽(yáng)性分析原因．可能是溶血血清中含有過(guò)氧化酶物質(zhì)（紅細(xì)胞或血紅蛋白中的亞鐵血紅素），能與聚乙烯孔內(nèi)預(yù)包被的抗原或抗體結(jié)合，在洗滌過(guò)程難以完全洗脫；也可能是谷胱甘肽等過(guò)氧化物酶的作用，谷胱甘肽廣泛存在于人體組織和細(xì)胞中，當(dāng)溶血時(shí)，細(xì)胞內(nèi)的過(guò)氧化物酶進(jìn)入血漿，并大量吸附于細(xì)胞碎片及纖維蛋白原上，從而增加加樣后微孔板洗滌的難度[4]，同辣根過(guò)氧化物酶作用相似，其可使過(guò)氧化氫釋放出原生態(tài)氧，從而催化底物甲聯(lián)苯胺生成可溶性物質(zhì)顯色，使乙型肝炎表面抗原易出現(xiàn)假陽(yáng)性。由于

7、一步法洗滌步驟往往難以完全洗脫，殘留的過(guò)氧化物酶催化底物四甲基聯(lián)苯胺顯藍(lán)色，使Ag本文檔由www.yxt1101.com云軒亭論文網(wǎng)整理提供！產(chǎn)生假陽(yáng)性。二步法首先將血清洗掉，殘留的過(guò)氧化物酶含量極微。溫育過(guò)程中不會(huì)與酶結(jié)合物所含抗原與抗體結(jié)合，再經(jīng)第二次洗滌，大大降低了殘留的可能性，保證了結(jié)果的準(zhǔn)確無(wú)誤。3．3對(duì)待結(jié)果要嚴(yán)謹(jǐn)經(jīng)過(guò)統(tǒng)計(jì)分析，見(jiàn)表1，我們可以看出，對(duì)于HbsAg陽(yáng)性的標(biāo)本檢測(cè)溶血與不溶血的檢測(cè)沒(méi)有差別；對(duì)于健康者的檢測(cè)，溶血與不溶血的檢測(cè)，P<0.001,結(jié)果有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，說(shuō)明兩者間存在差異，這就要求我們的檢驗(yàn)醫(yī)師在對(duì)“健康者”的檢測(cè)時(shí)，要慎重，出

8、現(xiàn)假陽(yáng)性后，建議采用二步