人凝血酶抗凝血酶復(fù)合物(tat)酶聯(lián)免疫分析

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1、人凝血酶抗凝血酶復(fù)合物(TAT)酶聯(lián)免疫分析試劑盒使用說明書本試劑盒僅供研究使用產(chǎn)品編號(hào)：CSB-E08431h檢測(cè)范圍：0.312ng/ml-20ng/ml最低檢測(cè)限：0.078ng/ml特異性：本試劑盒可同時(shí)檢測(cè)天然或重組的人TAT，且與其他相關(guān)蛋白無交叉反應(yīng)。有效期：6個(gè)月預(yù)期應(yīng)用：ELISA法定量測(cè)定人血清、血漿、細(xì)胞培養(yǎng)上清或其它相關(guān)生物液體中TAT含量。說明1．試劑盒保存：-20℃（較長(zhǎng)時(shí)間不用時(shí)）；2-8℃（頻繁使用時(shí)）。2．濃洗滌液低溫保存會(huì)有鹽析出，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶。3．中、英文說明書可

2、能會(huì)有不一致之處，請(qǐng)以英文說明書為準(zhǔn)。4．剛開啟的酶聯(lián)板孔中可能會(huì)含有少許水樣物質(zhì)，此為正?，F(xiàn)象，不會(huì)對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果造成任何影響。實(shí)驗(yàn)原理用純化的抗體包被微孔板，制成固相載體，往包被抗TAT抗體的微孔中依次加入標(biāo)本或標(biāo)準(zhǔn)品、生物素化的抗TAT抗體、HRP標(biāo)記的親和素，經(jīng)過徹底洗滌后用底物TMB顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的TAT呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD值），計(jì)算樣品濃度。試劑盒組成及試劑配制1.酶聯(lián)板(Assayplate)

3、：一塊（96孔）。2.標(biāo)準(zhǔn)品（Standard）：2瓶(凍干品)。3.樣品稀釋液(SampleDiluent)：1×20ml/瓶。4.生物素標(biāo)記抗體稀釋液（Biotin-antibodyDiluent）：1×10ml/瓶。5.辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素稀釋液?（HRP-avidinDiluent）：1×10ml/瓶。6.生物素標(biāo)記抗體（Biotin-antibody）：1×120μl/瓶（1：100）7.辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素（HRP-avidin）：1×120μl/瓶（1：100）8.底物溶液（TMBSubst

4、rate）：1×10ml/瓶。9.濃洗滌液（WashBuffer）：1×20ml/瓶，使用時(shí)每瓶用蒸餾水稀釋25倍。10.終止液（StopSolution）：1×10ml/瓶（2NH2SO4）。需要而未提供的試劑和器材1.標(biāo)準(zhǔn)規(guī)格酶標(biāo)儀2.高速離心機(jī)3.電熱恒溫培養(yǎng)箱4.干凈的試管和Eppendof管5.系列可調(diào)節(jié)移液器及吸頭，一次檢測(cè)樣品較多時(shí)，最好用多通道移液器6.蒸餾水，容量瓶等標(biāo)本的采集及保存1.血清：全血標(biāo)本請(qǐng)于室溫放置2小時(shí)或4℃過夜后于1000g離心20分鐘，取上清即可檢測(cè)，或?qū)?biāo)本放于-20℃或-

5、80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。1.血漿：可用EDTA或肝素作為抗凝劑，標(biāo)本采集后30分鐘內(nèi)于2-8°C1000g離心15分鐘，或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。2.細(xì)胞培養(yǎng)物上清或其它生物標(biāo)本：1000g離心20分鐘，取上清即可檢測(cè)，或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。注：標(biāo)本溶血會(huì)影響最后檢測(cè)結(jié)果，因此溶血標(biāo)本不宜進(jìn)行此項(xiàng)檢測(cè)。標(biāo)本的稀釋原則：首先通過文獻(xiàn)檢索的方式了解待測(cè)樣本的大致含量，確定適當(dāng)?shù)南♂尡稊?shù)。只有稀釋至標(biāo)準(zhǔn)曲線的范圍內(nèi)，檢測(cè)的結(jié)果才是準(zhǔn)確的。稀釋的過程中，應(yīng)

6、做好詳細(xì)的記錄。最后計(jì)算濃度時(shí)，稀釋了“N”倍，標(biāo)本的濃度應(yīng)再乘以“N”。標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋原則：2瓶，每瓶臨用前以樣品稀釋液稀釋至1ml，蓋好后靜置10分鐘以上，然后反復(fù)顛倒/搓動(dòng)以助溶解，其濃度為20ng/ml，做系列倍比稀釋后，分別稀釋20ng/ml，10ng/ml，5ng/ml，2.5ng/ml，1.25ng/ml，0.625ng/ml，0.312ng/ml，樣品稀釋液直接作為標(biāo)準(zhǔn)濃度0ng/ml，臨用前15分鐘內(nèi)配制。如配制10ng/ml標(biāo)準(zhǔn)品：取0.5ml（不要少于0.5ml）20ng/ml的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入

7、含0.5ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。生物素標(biāo)記抗體的稀釋原則：臨用前以生物素標(biāo)記抗體稀釋液稀釋，稀釋前根據(jù)預(yù)先計(jì)算好的每次實(shí)驗(yàn)所需的總量配制（每孔100μl），實(shí)際配制時(shí)應(yīng)多配制0.1-0.2ml。如10μl生物素標(biāo)記抗體加990μl生物素標(biāo)記抗體稀釋液的比例配制，輕輕混勻，在使用前一小時(shí)內(nèi)配制。辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素的稀釋原則：臨用前以辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素稀釋液稀釋，稀釋前根據(jù)預(yù)先計(jì)算好的每次實(shí)驗(yàn)所需的總量配制（每孔100μl），實(shí)際配制時(shí)應(yīng)多配制0.1-0.2ml

8、。如10μl辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素加990μl辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素稀釋液?的比例配制，輕輕混勻，在使用前一小時(shí)內(nèi)配制。操作步驟實(shí)驗(yàn)開始前，請(qǐng)?zhí)崆芭渲煤盟性噭?，試劑或樣品稀釋時(shí)，均需混勻，混勻時(shí)盡量避免起泡。每次檢測(cè)都應(yīng)該做標(biāo)準(zhǔn)曲線。如樣品濃度過高時(shí)，用樣品稀釋液進(jìn)行稀釋，以使樣品符合試劑盒的檢測(cè)范圍。1.加樣：分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔?？瞻卓准訕悠废♂屢?