多花木藍(lán)鹽脅迫的生理響應(yīng)試驗(yàn)方案

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1、多花木藍(lán)鹽脅迫的生理響應(yīng)試驗(yàn)方案材料和樣品：多花木蘭種子、NaCl、完全培養(yǎng)液（硝酸鈣1克、磷酸二氫鉀0.25克、硫酸鎂0.25克、氯化鐵0.25克、氯化鉀或硝酸鉀0.25克）、蒸餾水。溶液培養(yǎng)皿設(shè)置：設(shè)置5組不同培養(yǎng)條件，選擇飽滿、均勻、外觀良好的種子，放入溶液培養(yǎng)皿中，每皿30粒，分別加入相同量的完全培養(yǎng)液及6ml不同濃度的NaCl溶液（濃度梯度：0g/L、2g/L、4g/L、8g/L、12g/L），編號1、2、3、4、5，第1組為對照組，實(shí)驗(yàn)中每組設(shè)3個重復(fù)試驗(yàn)。將培養(yǎng)皿置于溫室中培養(yǎng)，每天下午3時適當(dāng)補(bǔ)充蒸發(fā)水分，以維持鹽分濃度的穩(wěn)定。培養(yǎng)相同時長，

2、待多花木藍(lán)長出幼苗后，分別測定5組多花木藍(lán)幼苗的各項(xiàng)指標(biāo)。一、多花木藍(lán)幼苗生長特性指標(biāo)測定生長指標(biāo)測定：記錄每組植株成活數(shù)量，計(jì)算成活率；用直尺和游標(biāo)卡尺測量株高、莖粗、最大側(cè)根長。根系活力的測定：TTC法材料、設(shè)備儀器及試劑（一）材料：水培的多花木藍(lán)根系。（二）儀器設(shè)備：分光光度計(jì)；分析天平（感量0.1mg）；電子頂載天平（感量0.1g）；溫箱；研缽；三角瓶50ml；漏斗；量筒100ml；吸量管10ml；刻度試管10ml；試管架；容量瓶10ml；藥勺；石英砂適量；燒杯10ml、1000ml。（三）試劑：1）乙酸乙酯（分析純）；2）次硫酸鈉（Na2S2O4）

3、，分析純，粉末；3）1%TTC溶液：準(zhǔn)確稱取TTC1.0g，溶于少量水中，定容到100ml，用時稀釋至各需要的濃度；4）磷酸緩沖液（1/15mol·L-1，pH7）。5）1mol·L-1硫酸：用量筒取比重1.84的濃硫酸55ml，邊攪拌邊加入盛有500ml蒸餾水的燒杯中，冷卻后稀釋至1000ml；6）0.4mol·L-1琥珀酸：稱取琥珀酸4.72g，溶于水中，定容至100ml即成。三、實(shí)驗(yàn)步驟（1）TTC標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作：取0.4%TTC溶液0.2ml放入10ml量瓶中，加少許Na2S2O4粉搖勻后立即產(chǎn)生紅色的甲腙。再用乙酸乙酯定容至刻度，搖勻。然后分別取此

4、液0.25ml、0.50ml、1.00ml、1.50ml、2.00ml置10ml容量瓶中，用乙酸乙酯定容至刻度，即得到含甲腙25μg、50μg、100μg、150μg、200μg的標(biāo)準(zhǔn)比色系列，以空白作參比，在485nm波長下測定吸光度，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。（2）稱取5組根尖樣品各0.5g，每組取三次，分別編號11、12、13，21、22、23，31、32、33，41、42、43，51、52、53，放入10ml燒杯中，加入0.4%TTC溶液和磷酸緩沖液的等量混合液10ml，把根充分浸沒在溶液內(nèi)，在37℃下暗保溫1～3h，此后加入1mol·L-1硫酸2ml，以停止反

5、應(yīng)。（與此同時做5個空白實(shí)驗(yàn)，先加硫酸，再加根樣品，其他操作同上）。（3）把根取出，吸干水分后與乙酸乙酯3～4ml和少量石英砂一起在研缽內(nèi)磨碎，以提出甲腙。紅色提取液移入試管，并用少量乙酸乙酯把殘?jiān)礈於?、三次，皆移入試管，最后加乙酸乙酯使總量?0ml，用分光光度計(jì)在波長485nm下比色，以空白試驗(yàn)作參比測出吸光度，查標(biāo)準(zhǔn)曲線，即可求出四氮唑還原量。四、結(jié)果計(jì)算四氮唑還原強(qiáng)度（mg.g-1根鮮重h-1）＝四氮唑還原量（mg）/根重（g）×?xí)r間（h）葉綠素含量測定：分光光度法材料、儀器設(shè)備及試劑（一）材料：新鮮的多花木藍(lán)葉片。（二）儀器設(shè)備：1.分光光度計(jì)；

6、2.電子頂載天平（感量0.01g）；3.研缽；4.棕色容量瓶；5.小漏斗；6.定量濾紙；7.吸水紙；8.擦境紙；9.滴管。（三）試劑：96％乙醇（或80％丙酮）；石英砂；碳酸鈣粉。三、實(shí)驗(yàn)步驟1.取新鮮多花木藍(lán)葉片，擦凈組織表面污物，剪碎（去掉中脈），混勻。2.稱取5組剪碎的新鮮樣品各0.2g，分別放入研缽中，加少量石英砂和碳酸鈣粉及2～3ml95％乙醇，研成均漿，再加乙醇10ml，繼續(xù)研磨至組織變白。靜置3～5min。3.取濾紙1張，置漏斗中，用乙醇濕潤，沿玻棒把提取液倒入漏斗中，過濾到25ml棕色容量瓶中，用少量乙醇沖洗研缽、研棒及殘?jiān)鼣?shù)次，最后連同殘?jiān)?/p>

7、一起倒入漏斗中。4.用滴管吸取乙醇，將濾紙上的葉綠體色素全部洗入容量瓶中。直至濾紙和殘?jiān)袩o綠色為止。最后用乙醇定容至25ml，搖勻。5.把葉綠體色素提取液倒入光徑1cm的比色杯內(nèi)。以95％乙醇為空白，在波長665nm、649nm下測定吸光度。四、實(shí)驗(yàn)結(jié)果計(jì)算：將測定得到的吸光值代入下面的式子：Ca=13.95A665－6.88A649Cb=24.96A649－7.32A665據(jù)此即可得到葉綠素a和葉綠素b的濃度（Ca、Cb：mg/L），二者之和為總?cè)~綠素的濃度。最后根據(jù)下式可進(jìn)一步求出植物組織中葉綠素的含量：葉綠素的含量（mg/g）=[葉綠素的濃度×提取液

8、體積×稀釋倍數(shù)]/樣品鮮重（或干重）。二、多花木藍(lán)幼