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1、小鼠肝細(xì)胞線粒體的超活染色及觀察姓名：高超學(xué)號(hào):201300140020同組者：樊曉航一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?．掌握線粒體的超活染色原理及方法。2．觀察動(dòng)物肝細(xì)胞內(nèi)線粒體的形態(tài)、數(shù)量與分布。二，實(shí)驗(yàn)原理：1，活體染色是指用燃料標(biāo)記生活有機(jī)體的細(xì)胞或組織但又無(wú)毒害的一種染色方法。它的目的是顯示活細(xì)胞內(nèi)的某些結(jié)構(gòu)，同時(shí)即不影響細(xì)胞的生命活動(dòng)也不會(huì)產(chǎn)生任何物理、化學(xué)變化導(dǎo)致細(xì)胞的死亡?；钊炯夹g(shù)可用來(lái)研宄生活狀態(tài)下的細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)和生理、病理狀態(tài)?；铙w染色之所以能固定、堆積在細(xì)胞內(nèi)某些特殊的部分，主要是染料的“電化學(xué)”特性起作用。堿性燃料的膠粒表
2、面帶陽(yáng)離子，酸性染料的膠粒表面帶有陰離子；而被染的部分本身也是具有陰離子或陽(yáng)離子，這樣，它們被此就發(fā)生了吸引作用。但不是任何染料都可以作為活體染色劑之用，應(yīng)選擇那些對(duì)細(xì)胞無(wú)毒性或毒性極小的染料配成稀的溶液來(lái)使用。一般以堿性染料最為常用，因?yàn)閴A性染料具有溶解在類脂質(zhì)的特性，易于被細(xì)胞吸收，如中性紅、詹鈉斯綠、次甲基藍(lán)、甲苯胺藍(lán)、亮焦油紫等。其中詹鈉斯綠和中性紅兩種堿性染料是活體染色劑中最常用的染料，分別對(duì)線粒體和液泡系有特異性的染色。詹納斯綠B這種堿性染料是活體染色中重要的材料，對(duì)線粒體的染色有專一性，可專一性地對(duì)線粒體進(jìn)行活染，
3、這是由于線粒體內(nèi)的細(xì)胞色素氧化酶系的作用，使染料始終保locatedintheTomb,DongShenJiabang,deferthenextdayfocusedontheassassination.Linping,Zhejiang,1ofwhichliquorwinemasters(WuzhensaidinformationisCarpenter),whogotAfewbayonets,duetomissedfatal,whennightcame持氧化狀態(tài)（即有色狀態(tài)），呈藍(lán)綠色；而線粒體周圍的細(xì)胞質(zhì)中，這些染料被還原成無(wú)色
4、的色基。2，線粒體是細(xì)胞內(nèi)一種重要細(xì)胞器，是細(xì)胞進(jìn)行呼吸作用的場(chǎng)所。細(xì)胞的各項(xiàng)活動(dòng)所需要的能量，主要是通過線粒體呼吸作用來(lái)提供的?；铙w染色是應(yīng)用無(wú)毒或毒性較小的染色劑真實(shí)地顯示活細(xì)胞內(nèi)某些結(jié)構(gòu)而又很少影響細(xì)胞生命活動(dòng)的一種染色方法。詹納斯綠B（JanusgreenB）是線粒體的專一性活體染色劑。線粒體中細(xì)胞色素氧化酶系使染料保持氧化狀態(tài)呈藍(lán)綠色，而在周圍的細(xì)胞質(zhì)中染料被還原，成為無(wú)色狀態(tài)。不同細(xì)胞中線粒體的形態(tài)和數(shù)目不同。在電子顯微鏡下，線粒體的外形多樣，如圓形、橢圓形、啞鈴形和桿狀。線粒體的數(shù)目與細(xì)胞類型和細(xì)胞的生理狀態(tài)有關(guān)，
5、線粒體多聚集在細(xì)胞生理功能旺盛的區(qū)域。線粒體的細(xì)胞色素氧化酶能使詹納新綠染料始終保持在氧化狀態(tài)而呈藍(lán)色，周圍細(xì)胞內(nèi)的染料卻被還原成無(wú)色的色基，在進(jìn)行細(xì)胞的體外染色時(shí)，至少要使材料在詹納斯綠染料中染色15min后再蓋上蓋玻片，以使材料充分氧化。三，實(shí)驗(yàn)用品與儀器：1.器材：小白鼠，解剖盤，鑷子，剪刀，載玻片，蓋玻片，滴管，雙凹片，小燒杯，顯微鏡；locatedintheTomb,DongShenJiabang,deferthenextdayfocusedontheassassination.Linping,Zhejiang,1of
6、whichliquorwinemasters(WuzhensaidinformationisCarpenter),whogotAfewbayonets,duetomissedfatal,whennightcame2.試劑1/500詹納綠B染液；Ringer試劑四，實(shí)驗(yàn)步驟：1，用斷頭法處死小白鼠，置于解剖盤中。剪開腹腔，取出肝臟，選取邊緣較薄的肝組織0.5cm3，放入小燒杯中，用Ringer液沖洗去血污。2．滴加1/500詹納綠B溶液于雙凹片的凹穴中，再將上述洗凈的肝組織移入染液中，染色20—30min。以組織塊邊緣被染成藍(lán)綠色
7、為準(zhǔn)。3．吸去染液，將肝組織重置小燒杯中，滴加Ringer溶液0.5ml，用剪刀將組織充分剪碎制成懸液。4．取上述細(xì)胞懸液滴片，加上蓋玻片，在高倍鏡下觀察。五，實(shí)驗(yàn)及結(jié)果：locatedintheTomb,DongShenJiabang,deferthenextdayfocusedontheassassination.Linping,Zhejiang,1ofwhichliquorwinemasters(WuzhensaidinformationisCarpenter),whogotAfewbayonets,duetomissed
8、fatal,whennightcame結(jié)果：小鼠肝細(xì)胞質(zhì)中的線粒體被染成藍(lán)綠色（理想狀態(tài)下），且分布均勻。六，注意事項(xiàng)：1．在從小鼠體內(nèi)取肝組織塊時(shí)要盡量快，從而能夠保證它更高的活性。2．染色時(shí)要使組織塊上面部分半露在染液外，不可完全淹沒，以便使線粒體酶系得到氧
