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1、微生物菌種收藏方法1、傳代保存法：有些微生物當碰到冷凍或干燥等處理時，會很快死亡，因此在這種情況下，只能求助于傳代培養(yǎng)保存法。傳代培養(yǎng)就是要定期地進行菌種轉(zhuǎn)接、培養(yǎng)后再保存，它是最基本的微生物保存法，例如酸奶等常用生產(chǎn)菌種的保存?！ 鞔４鏁r，培養(yǎng)基的濃度不宜過高，營養(yǎng)成分不宜過于豐富，尤其是碳水化合物的濃度應(yīng)在可能的范圍內(nèi)盡量降低。培養(yǎng)溫度通常以稍低于最適生長溫度為好。若為產(chǎn)酸菌種，則應(yīng)在培養(yǎng)基中添加少量碳酸鈣?！ ∫话愕?，大多數(shù)菌種的收躲溫度以5℃為好，像厭氧菌、霍亂弧菌及部分病原真菌等微生物菌種則可以使用37℃進行保存，而蕈類等大型食
2、用菌的菌種則可以室溫直接保存?！ 鞔囵B(yǎng)保存法固然簡便，但其缺點也很明顯，如：①菌種管棉塞經(jīng)常輕易發(fā)霉；②菌株的遺傳性狀輕易發(fā)生變異；③反復(fù)傳代時，菌株的病原性、形成生理活性物質(zhì)的能力以及形成孢子的能力等均有降低；④需要定期轉(zhuǎn)種，工作量大；⑤雜菌的污染機會較多?！ ?、液體石蠟覆蓋保存法：該法較前一種方法保存菌種的時間更長，適用于霉菌、酵母菌、放線菌及需氧細菌等的保存。此法可防止干燥，并通過限制氧的供給而達到削弱微生物代謝作用的目的。其具有方法簡便的優(yōu)點，同時也適用于不宜冷凍干燥的微生物（如產(chǎn)孢能力低的絲狀菌）的保存，而某些細菌如固氮菌、乳
3、酸桿菌、明串珠菌、分枝桿菌、紅螺菌及沙門氏菌等和一些真菌如卷霉菌、小克銀漢霉、毛霉、根霉等不宜采用此法進行保存?！ ?、載體保存法：即將微生物吸附在適當載體上進行干燥保存的方法。常用的有方法包括以下幾種，如 ①土壤保存法：主要用于能形成孢子或孢囊的微生物菌種的收躲。方法是在滅菌的土壤中加進菌液，立即在室溫下進行干燥或使菌體繁殖后再干燥，然后冷躲或在室溫下密封保存。保存用的土壤原則上以肥沃的耕土為宜，土壤需風干、粉碎、過篩和滅菌?！ ∈刮⑸镌谕寥乐蟹敝澈筮M行干燥保存的方法是：取適量土壤（5克）置于塞有棉塞的試管中，加水或加進充分稀釋的液體培
4、養(yǎng)基（以含水量為土壤最大持水量的60%為宜），然后高壓滅菌。再將需保存的微生物進行大量接種，培養(yǎng)至菌絲能用肉眼確認的程度為止，移進干燥器中經(jīng)短時間干燥或風干后密封，冷躲或室溫保存?！ 、谏巴帘４娣ǎ喝∏鍧嵉纳埃^60目篩往掉大砂粒，并用磁鐵吸往砂中鐵屑，再用NaOH溶液、10%HCl溶液和水交替清洗數(shù)次，干燥后，置于試管或安瓶管中保持2～3cm深，再經(jīng)干熱滅菌后，加進1ml菌種培養(yǎng)液，經(jīng)充分混勻后，放進真空干燥器中，完全干燥后熔封保存。也可用二份洗凈的砂（經(jīng)HCl預(yù)處理）和一份貧瘠、過篩的黃土攙和后滅菌，再進行菌種收躲。 ?、酃枘z保存法：以6
5、～16目的無色硅膠代替砂子，干熱滅菌后，加進菌液。加菌液時，由于硅膠的吸附熱常使溫度升高，因而需想法加以冷卻?！ 、艽胖楸４娣ǎ簩⒕航M素燒磁珠（或多孔玻璃珠）后再進行干燥保存的一種方法。在螺旋口試管中裝進1/2管高的硅膠（或無水CaSO4），上展玻璃棉，再放上10～20粒磁珠，經(jīng)干熱滅菌后，接進菌懸液，最后冷躲、室溫收躲或減壓干燥后密封收躲。本法對酵母菌很有效，特別適用于根瘤菌，可保存長達兩年半時間?！ 、蓰熎け４娣ǎ涸邴熎?nèi)加進60%的水，經(jīng)滅菌后接種培養(yǎng)，最后干燥收躲?！ 、藜埰V紙）保存法：將滅菌紙片浸進培養(yǎng)液或菌懸液中，常壓或減
6、壓干燥后，置于裝有干燥劑的容器內(nèi)進行保存?！ ?、懸液保存法：即使微生物混懸于適當溶液中進行保存的方法。常用的有， ①蒸餾水保存法：適用于霉菌、酵母菌及盡大部分放線菌，將其菌體懸浮于蒸餾水中即可在室溫下保存數(shù)年。本法應(yīng)留意避免水分的蒸發(fā)?！ 、谔且罕４娣ǎ哼m用于酵母菌，如將其菌體懸浮于10%的蔗糖溶液中，然后于冷暗處保存，可長達10年。除此之外，也可使用緩沖液或食鹽水等進行保存。 5、寄主保存法：即令微生物侵進其寄主后加以保存的方法?！ ?、冷凍保存法：適用于抗凍力強的微生物。這些微生物可在其菌體細胞外遭受凍結(jié)的情況下而不受損傷，而對其它
7、大多數(shù)微生物而言，無論在細胞外凍結(jié)還是在細胞內(nèi)凍結(jié)，都會對菌體造成損傷，因此當采用這種收躲方法時，應(yīng)留意以下幾點， ?、僖x擇適于冷凍干燥的菌齡細胞； ?、谝x擇適宜的培養(yǎng)基，由于某些微生物對冷凍的抵抗力，常隨培養(yǎng)基成分的變化而顯示出巨大差異； ?、垡x擇合適的菌液濃度，通常菌液濃度越高，生存率越高，保存期也越長； ④最好在菌液內(nèi)不添加電解質(zhì)（如食鹽等）； ?、菘稍诰簝?nèi)添加甘油等保護劑，以防止在冷凍過程中出現(xiàn)菌體大量死亡的現(xiàn)象。同樣，也可添加各種糖類、往纖維血液和脫脂牛乳等具有良好保護效果的溶劑，但對有些微生物而言，不加保護劑時更有效。
8、?、拊瓌t上應(yīng)盡快進行冷凍處理，但當加進保護劑時，可靜置一段時間后再進行處理?！ 、呔蛣游锛毎?，應(yīng)在－20℃范圍內(nèi)以1℃/min左右的速度緩慢降溫，此后必須盡快降
