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《基于mGluR2和mGluR3受體激動作用對蜘蛛香環(huán)烯醚萜類成分抗焦慮機制研究》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關內容在學術論文-天天文庫。
1、國內圖書分類號：R285.5密級：公開國際圖書分類號：西南交通大學研究生學位論文基于mGluR2和mGluR3受體激動作用對蜘蛛香環(huán)烯醚萜類成分抗焦慮機制研究年級二〇一五級1姓名張雪梅1申請學位級別醫(yī)學碩士1專業(yè)藥學1指導老師閆智勇教授1李韶菁副教授1二零一八年五月ClassifiedIndex:R285.5U.D.C:SouthwestJiaotongUniversityMasterDegreeThesisAnxiolyticMechanismofIridoidsofRootsandRhizomesofValerianajatamansiJonesBasedontheAgonismo
2、fmGluR2andmGluR3Grade：2015Candidate：XuemeiZhangΑcademicDegreeAppliedfor：MasterofMedicineSpeciality：PharmacySupervisor：Prof.ZhiyongYanAsso.Prof.ShaojingLiMay,2018西南交通大學碩士研究生學位論文第I頁摘要目的探討基于第Ⅱ組代謝型谷氨酸受體（mGluR2和mGluR3）激動作用的蜘蛛香環(huán)烯醚萜類成分抗焦慮機制。方法1.采用脂質體轉染方法構建Vero-Ga15-mGluR2細胞和Vero-Ga15-mGluR3細胞，并采用Real-T
3、imePCR驗證目的基因GNA15、mGluR2和mGluR3的表達。2.采用CCK-8法檢測不同濃度的蜘蛛香總環(huán)烯醚萜（totaliridoidsofrootsandrhizomesofValerianajatamansiJones，TIV）、蜘蛛香素E、mGluR2和mGluR3激動劑（LY354740）和谷氨酸對Vero-Ga15-mGluR2細胞和Vero-Ga15-mGluR3細胞存活的影響，以便確定藥物的濃度。采用Fluo-3/AM作2+為鈣離子（Ca）熒光探針，使用高內涵藥物篩選系統(tǒng)檢測TIV和蜘蛛香素E2+對Vero-Ga15-mGluR2和Vero-Ga15-mGlu
4、R3細胞內Ca熒光強度的影響。3.采用梯度離心法制備大鼠大腦皮質突觸體，運用透射電子顯微鏡鑒定其微觀形態(tài)，以及檢測突觸體乳酸脫氫酶（LDH）活性。采用流式細胞儀檢測TIV和蜘蛛香2+素E對大鼠大腦皮質突觸體內Ca熒光強度的影響。4.采用大鼠應激焦慮模型，通過高架十字迷宮和敞箱行為學實驗驗證TIV抗焦慮作用，酶聯(lián)免疫法檢測大鼠大腦皮質的腺苷酸環(huán)化酶（AC）活性、環(huán)磷酸腺苷（cAMP）含量、谷氨酸（Glu）含量，WesternBlot法檢測大鼠大腦皮質PKA?/?/?、mGluR2和mGluR3蛋白表達水平。結果1.轉染細胞—Vero-Ga15-mGluR2和Vero-Ga15-mGluR
5、3構建成功，目的基因GNA15、mGluR2和mGluR3的表達量高，符合細胞實驗的要求。2.用高內涵藥物篩選系統(tǒng)檢測TIV和蜘蛛香素E對Vero-Ga15-mGluR2細胞和Vero-Ga15-mGluR3細胞鈣流的影響，對于Vero-Ga15-mGluR2細胞，與正常組相比2+較，陽性藥組Ca熒光平均值顯著增強（P<0.05）；谷氨酸組、3μg/mL和12μg/mLTIV組、10μM和20μM蜘蛛香素E組熒光值非常顯著增強（P<0.01）；對于Vero-Ga15-mGluR3細胞，與正常組相比，陽性藥組，12μg/mLTIV組熒光平均值非常顯著增強（P<0.01）；谷氨酸組，6μg
6、/mLTIV組，10μM蜘蛛香素E組熒光值顯著增強（P<0.05）。3.通過電鏡觀察，制備的突觸體包含典型的突觸體形態(tài)結構特征；檢測突觸體的乳酸脫氫酶活性，懸液中總的乳酸脫氫酶活西南交通大學碩士研究生學位論文第II頁性與上清液維持在一定比例不變，用流式細胞儀檢測蜘蛛香環(huán)烯醚萜類成分對2+突觸體內Ca的影響，與正常組相比較，陽性藥組、6μg/mLTIV組、20μM蜘蛛香素E組熒光平均值非常顯著降低（P<0.01）；10μM蜘蛛香素E熒光值顯著降低（P<0.05）。4.大鼠應激焦慮模型成功建立，在2個焦慮模型行為學實驗中，模型組動物產生了焦慮狀態(tài)，而陽性組及TIV各劑量組（5、10和20m
7、g/kg）動物的焦慮行為均有明顯改善。抗焦慮機制研究結果顯示，與模型組比較，TIV的高、低劑量組大腦皮質AC活性，中劑量組大腦皮質的cAMP含量，高、中劑量組大腦皮質的Glu含量均非常顯著降低（P<0.01），高劑量組大腦皮質的cAMP含量顯著降低（P<0.05）；高、低劑量組mGluR2表達水平和中、低劑量組mGluR3表達均非常顯著增加（P<0.01）；中、低劑量組PKA?/?/?表達水平非常顯著降低（P<0.01）。結論1.蜘蛛香環(huán)烯醚萜
