資源描述：
《醫(yī)藥學(xué)藥學(xué)畢業(yè)論文 天南星類中藥材的page鑒別》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、湖南師范大學(xué)本科畢業(yè)論文考籍號(hào)：XXXXXXXXX姓名：XXX專業(yè)：醫(yī)藥學(xué)藥學(xué)論文題目：天南星類中藥材的PAGE鑒別指導(dǎo)老師：XXX二〇一一年十二月十日 摘要 應(yīng)用聚丙烯酰胺凝膠電泳(簡(jiǎn)稱PAGE)技術(shù)，對(duì)天南星類中藥材進(jìn)行鑒別分析結(jié)果表明：三種天南星藥材樣品的PAGE圖譜完全不同，可作為天南星類中藥材鑒別的一種有效方法。Abstract: PolyacrylamideGelelectrophoresis［PAGE］wasusedtodeterminethetraditionalChines
2、emedicinalmaterialsofthreekindsArsaemaconsangumeumSchott.ResultsShowedthattheirPAGEbandswerealwaysquitedistinct,whichcanbeusedtoassesstheirquatityanddistinguishthemfromconfusablevarieties. Keywords:ArisaemaconsangumeumSchott.Arisaemaheterophyllumbi.
3、 pinelliapeclatisectaSchott.PAGEidentification. 天南星主要用于祛風(fēng)定驚，散結(jié)化痰。外用可治療瘡瘍腫毒、蛇蟲咬傷。近年來臨床上用于治療宮頸癌，有很好的療效。因天南星藥材親緣關(guān)系相近，性狀類別相似，用常規(guī)的性狀顯微鑒別方法很難鑒別分析。研究表明，天南星藥理作用的主要有效成分含有蛋白質(zhì)，故可應(yīng)用PAGE技術(shù)對(duì)其進(jìn)行鑒別［1］［2］?，F(xiàn)報(bào)道如下?！ ? 實(shí)驗(yàn)材料與儀器 天南星(ArisaemaConsanguineumSchott)樣品Ⅰ、異葉天南星
4、(ArisaemaheterophyllumBi)樣品Ⅱ、虎掌(掌葉半夏)(PinelliapeclatisectaSchott)樣品Ⅲ，以上樣品均為鮮品，由湖北中醫(yī)學(xué)院藥學(xué)系鑒定教研室鑒定并提供?！ YY-Ⅲ4型雙穩(wěn)電泳儀、DYY-Ⅲ28型垂直板型電泳槽(北京六一儀器廠)?！ ? 試劑的配制與凝膠的制備 2.1 試劑配制 A：36.6g三羥甲基氨基甲烷(Tris)，48ml，1mol/L的Hcl加水到1000ml;B：5.98Tris,48ml,1molHcl加水到100ml；C：30g
5、丙烯酰胺(Acr)，0.8g甲叉雙丙烯酰胺(Bis)加水到100ml過濾后使用；D：10gAcr,2.5gBis加水到100ml過濾后使用；E：4mg核黃素加水到100ml；F：40%(W/V)的蔗糖溶液；G：0.56g的過硫酸銨加水到100ml(AP溶液)；H：6gTris,28.8g甘氨酸加水到1000ml，使用時(shí)稀釋10倍，此為電極緩沖液?！ ?.2 凝膠的制備及電泳槽的安裝［3］ 2.2.1 本實(shí)驗(yàn)采用垂直板電泳槽 凝膠模子是由兩塊玻璃裝入一個(gè)用硅酮橡膠做成的夾套內(nèi)構(gòu)成，玻璃板厚2mm
6、，兩玻璃板之間由夾套隔開厚約1.5mm，膠就在這兩板之間的膠室內(nèi)聚合成平板膠。安裝電泳槽時(shí)，玻璃板先用熱的去污劑刷洗或洗液浸泡，然后用熱水沖洗，再用蒸餾水沖洗，直立干燥。勿用手指接觸洗凈的玻璃板面，將兩塊玻璃板裝入橡膠夾套內(nèi)，然后垂直地裝入兩個(gè)半槽之間，用螺絲將兩個(gè)半槽固定在一起，注意在上螺絲時(shí)，要按照一定的順序一個(gè)個(gè)的逐步檸緊，均勻用力。電泳槽裝好后將熔化的1.5%的瓊脂注入背面槽內(nèi)的小池中，使在膠池的下部凝結(jié)成約0.5cm厚的瓊脂層，備用?！ ?2.2.2 分離膠的制備 將試劑A∶C∶水∶
7、G按1∶2∶1∶4的比例(V/V)混合，然后按每ml膠液0.6μl的比例加入加速劑四甲基乙二胺(TEMED)、混合后立即裝入槽中，膠液加到距玻璃板頂部3cm處(注意排除可能存在的氣泡)，上面再加約4mm厚的水層以隔絕空氣并使膠面平坦?！ ?.2.3 濃縮膠的制備 將試劑B∶D∶E∶F按1∶2∶1∶4的比例(V/V)混合，然后按每ml膠液1.5μl的比例加入TEMED。然后再加到吸去表面水層的分離膠上部，高約3cm，并放好樣品槽模板(俗稱梳子)，光照聚合，聚合約需30～40分鐘，膠聚合后，小心取
8、出“梳子”，加入上槽電極緩沖液備用?！ ? 樣品液的制備 精確稱取樣品Ⅰ2g加0.9%的生理鹽水4ml研磨成漿后置離心管中離心15分鐘(3000rpm/min)，取上清液2ml加入4ml丙酮沉淀離心，傾出上清液，將沉淀加2ml蒸餾水溶解后裝入半透膜袋中透析48小時(shí)(其間更換蒸餾水?dāng)?shù)次)，即得樣品液Ⅰ，置冰箱中備用。用同樣的方法處理Ⅱ、Ⅲ號(hào)樣品?！ ? 點(diǎn)樣 用微量注射器分別吸?、?、Ⅱ、Ⅲ號(hào)樣品液各25μl注入到樣品槽內(nèi)的電極緩沖液與濃縮膠之間界面上。并在上槽緩沖液中加入1～3滴溴酚藍(lán)指示劑示
