長(zhǎng)鏈非編碼RNA H19在膀胱癌細(xì)胞中作為ceRNA拮抗let-7d促進(jìn)腫瘤發(fā)生的分子機(jī)制研究

《長(zhǎng)鏈非編碼RNA H19在膀胱癌細(xì)胞中作為ceRNA拮抗let-7d促進(jìn)腫瘤發(fā)生的分子機(jī)制研究》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線(xiàn)閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫(kù)。

1、分類(lèi)號(hào)：R737.14單位代碼：10159密級(jí)：公開(kāi)學(xué)號(hào)：201520266碩士學(xué)位論文中文題目：長(zhǎng)鏈非編碼RNAH19在膀胱癌細(xì)胞中作為ceRNA拮抗let-7d促進(jìn)腫瘤發(fā)生的分子機(jī)制研究英文題目：LongNon-codingRNAH19asaceRNAantagonisttolet-7dinbladderCancercellsanditsMolecularMechanism論文作者：寧伯彬指導(dǎo)教師：都書(shū)琪教授學(xué)科專(zhuān)業(yè)：泌尿外科完成時(shí)間：2018年2月中國(guó)醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文中國(guó)醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文長(zhǎng)鏈非編碼RNAH19在膀胱癌

2、細(xì)胞中作為ceRNA拮抗let-7d促進(jìn)腫瘤發(fā)生的分子機(jī)制研究LongNon-codingRNAH19asaceRNAantagonisttolet-7dinbladderCancercellsanditsMolecularMechanism論文作者寧伯彬指導(dǎo)教師都書(shū)琪教授申請(qǐng)學(xué)位醫(yī)學(xué)碩士培養(yǎng)單位第一臨床學(xué)院一級(jí)學(xué)科臨床醫(yī)學(xué)二級(jí)學(xué)科外科學(xué)研究方向泌尿外科學(xué)論文起止時(shí)間2015年10月—2018年2月論文完成時(shí)間2018年2月中國(guó)醫(yī)科大學(xué)（遼寧）2018年2月中國(guó)醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文中國(guó)醫(yī)科大學(xué)學(xué)位論文獨(dú)創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明：本論文

3、是我個(gè)人在導(dǎo)師指導(dǎo)下獨(dú)立進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果，論文中除加以標(biāo)注的內(nèi)容外，不包含其他人或機(jī)構(gòu)已經(jīng)發(fā)表或撰寫(xiě)過(guò)的研究成果，也不包含本人為獲得其他學(xué)位而使用過(guò)的成果。對(duì)本研究提供貢獻(xiàn)的其他個(gè)人和集體均已在文中進(jìn)行了明確的說(shuō)明并表示謝意。本人完全意識(shí)到本聲明的法律結(jié)果由本人承擔(dān)。論文作者簽名：日期：年月日中國(guó)醫(yī)科大學(xué)學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書(shū)本學(xué)位論文作者完全了解學(xué)校有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，同意學(xué)校保留并向國(guó)家有關(guān)部門(mén)或機(jī)構(gòu)送交學(xué)位論文的原件、復(fù)印件和電子版，允許學(xué)位論文被查閱和借閱。本人授權(quán)中國(guó)醫(yī)科大學(xué)可以將本學(xué)位論文的全部

4、或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行檢索，可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存和匯編學(xué)位論文。保密（），在年后解密適用本授權(quán)書(shū)。（保密：請(qǐng)?jiān)诶ㄌ?hào)內(nèi)劃“√”）論文作者簽名：指導(dǎo)教師簽名：日期：年月日日期：年月日中國(guó)醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文摘要目的：探究LncRNAH19作為ceRNA通過(guò)拮抗let-7d調(diào)控靶基因Lin28bmRNA表達(dá)，以促進(jìn)膀胱癌細(xì)胞的增殖和轉(zhuǎn)移作用。獲得LncRNAH19作為let-7d的調(diào)控靶基因及相關(guān)信號(hào)傳導(dǎo)通路的可靠證據(jù)，意在闡明LncRNAH19的功能，揭示膀胱癌發(fā)生增殖及侵襲轉(zhuǎn)移的新分子機(jī)制，為尋找膀胱癌診斷和

5、治療的靶基因和藥物提供進(jìn)一步的科學(xué)依據(jù)。研究方法：通過(guò)GEO數(shù)據(jù)庫(kù)中的芯片數(shù)據(jù)分析，選取我們要進(jìn)行研究的目的基因。在2015年7月至2016年7月就診就中國(guó)醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院泌尿外科，并接受手術(shù)治療的膀胱癌患者組織中抽取35例膀胱癌患者臨床標(biāo)本組織及其相應(yīng)臨近部位的正常組織，通過(guò)病理組織認(rèn)證，同時(shí)伴有詳細(xì)的相關(guān)臨床病例資料。對(duì)于抽取的35對(duì)標(biāo)本進(jìn)行qRT-PCR（Quantitativereal-timepolymerasechainreaction）實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，確定H19和Lin28b為研究對(duì)象;并通過(guò)進(jìn)一步的qRT-PCR實(shí)驗(yàn)

6、和統(tǒng)計(jì)學(xué)計(jì)算，推測(cè)H19與Lin28b在人膀胱癌組織中表達(dá)量的相關(guān)性分析。接著我們選取了本實(shí)驗(yàn)室現(xiàn)有的4種膀胱癌細(xì)胞系及1種正常的膀胱細(xì)胞系，測(cè)量每種細(xì)胞系中H19的表達(dá)量。接著通過(guò)脂質(zhì)體Lipo3000轉(zhuǎn)染人工合成的H19SiRNA于膀胱癌細(xì)胞T24中，驗(yàn)證3條不同SiRNA中效能最好的一條。通過(guò)脂質(zhì)體Lipo3000轉(zhuǎn)染人工合成的H19SiRNA，轉(zhuǎn)染至膀胱癌細(xì)胞T24內(nèi)，并以Negativecontrol（NC）作為對(duì)照，通過(guò)qRT-PCR實(shí)驗(yàn)對(duì)比兩組實(shí)驗(yàn)組中H19，Lin28b及Let-7d的表達(dá)量，驗(yàn)證H19與Lin28

7、b之間通過(guò)Let-7d進(jìn)行調(diào)控的相互關(guān)系，以及通過(guò)CCK8實(shí)驗(yàn)和平板克隆實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證其對(duì)膀胱癌細(xì)胞增殖的影響，通過(guò)劃痕實(shí)驗(yàn)和侵襲實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證其對(duì)膀胱癌細(xì)胞侵襲的影響。通過(guò)生物信息學(xué)網(wǎng)站（TargetScan）預(yù)測(cè)H19和Lin28b與let-7d的結(jié)合位點(diǎn)，并通過(guò)已發(fā)表的相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行了進(jìn)一步的驗(yàn)證。在體外膀胱癌細(xì)胞中，利用qRT-PCR和細(xì)胞功能實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證H19、Lin28b與let-7d的互相調(diào)控關(guān)系以及對(duì)膀胱癌細(xì)胞的影響：通過(guò)脂質(zhì)體Lipo3000轉(zhuǎn)染人工合成的H19的SiRNA及Let-7d的inhibitor，轉(zhuǎn)染至膀胱癌細(xì)胞563

8、7內(nèi)，并以只轉(zhuǎn)染了H19SiRNA的5637膀胱癌細(xì)胞作為對(duì)照，通過(guò)qRT-PCR實(shí)驗(yàn)對(duì)比兩組實(shí)驗(yàn)組中H19，Lin28b及Let-7d的表達(dá)量，驗(yàn)證H19與Lin28b之間通過(guò)Let-7d進(jìn)行調(diào)控的相互關(guān)系，以及通過(guò)CCK8實(shí)驗(yàn)和平板克隆實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證