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1、SN中華人民共和國進(jìn)出口商品檢驗(yàn)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)sN/T0456一95進(jìn)出口紗線霉斑鑒定方法Identificationmethodofmouldspeckonimportandexportyarn1995一09一06發(fā)布1996一01一01實(shí)施中華人民共和國國家進(jìn)出口商品檢驗(yàn)局發(fā)布中華人民共和國進(jìn)出口商品檢驗(yàn)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)出口紗線霉斑鑒定方法SN/T0456一95IdentificationmethodofmouldspeckonImportandexportyarn，主腸內(nèi)容與適用范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了進(jìn)出口紗線霉斑的鑒定方法。本標(biāo)
2、準(zhǔn)適用于進(jìn)出口棉紗、毛紗、麻紗、化纖紗線、混紡紗線上的霉斑的檢驗(yàn)。2儀器和設(shè)備2.1顯微鏡(400^-1000X)。2.2恒溫箱(25^280C)o2.3無菌操作臺。2.4高壓滅菌鍋。2.5酒精燈。2.6不銹鋼接種針、無菌鑷子。2.7燒杯(300^500mL),2.8三角瓶(500^-1000mL),2.9培養(yǎng)平皿，內(nèi)徑9cm,2.10稱量皿，內(nèi)徑6.5cm,2.11吸管，1mL,5mL,10mL.3培養(yǎng)垂3.1虎紅培養(yǎng)基(RBC)3.11成分葡萄搪(分析純)10.0g硫酸鎂(分析純)。59磷酸二氫鉀(分析純)1.0g
3、蛋白陳(微生物培養(yǎng)基用)5.0g氯霉素(1mg相當(dāng)于992單位)0.1g1/3000虎紅水溶液100.0mL瓊脂15.0g蒸餾水定容至1000.0mL2制備將3.1.1中的葡萄糖、硫酸鎂、磷酸二氫鉀、蛋白陳、瓊脂于800.0mL蒸餾水中加熱溶解后，再加入虎紅溶液和氯霉素，然后用燕餾水定容至1000.0mL。調(diào)節(jié)pl-I5.5-6.0,將配制好的培養(yǎng)基裝人三角瓶后，在121'C高壓滅菌20mine中華人民共和國國家進(jìn)出口商品檢驗(yàn)局1995-09-06批準(zhǔn)1996一01一01實(shí)施sN/T0456一95注1/3000虎紅水溶
4、液的配制取0.033g孟加拉紅(虎紅)瓊脂溶于”.97mL無菌水中3.2馬鈴薯培養(yǎng)基(PDA)3.2.1成分葡萄糖(分析純)20.0g去皮馬鈴薯200.0g瓊脂15.0g蒸餾水定容至1000.0ml.3.2.2制備將去皮馬鈴薯切成小塊，先用蒸餾水煮15min,然后用濾布過濾，過濾后加入3.2.1中的葡萄糖和瓊脂于800.0mL蒸餾水中，加熱溶解后，用蒸餾水定容至1000.0mL.調(diào)節(jié)pH5.5-6.0.將配制好的培養(yǎng)基裝入三角瓶后，在121℃高壓滅菌20min.3.3察氏培養(yǎng)基3.3.1成分硝酸鈉(分析純)3.09磷酸
5、氫二鉀(分析純)1.0g硫酸鎂(MgSO,·7H,O)(分析純)0.5g氯化鉀(分析純)0.5g硫酸亞鐵(分析純)0.01g蔗搪30.0g瓊脂15.0g蒸餾水定容至1000.0mL13.2制備將3.3.1各成分(除蔗搪外)加熱溶解后，加入蔗糖，調(diào)節(jié)pH6.8^-6.9,將配制好的培養(yǎng)基裝入三角瓶后，在121C高壓滅菌20min.4試劑4.1無菌水。42列西爾透明劑(鏡檢用透明劑)甘油(分析純)120.0mL2%乙酸鉀(分析純)300.0mL無水酒精180.0mL將上述各成分充分混合均勻后備用。注:2%乙酸鉀溶液的配制，
6、稱取6.0g乙酸鉀溶于294.0mL無菌水中20%甘油(鏡檢用透明劑)甘油(分析純)20.0mL無菌水100.0mL將上述成分充分混合均勻后備用(此透明劑僅次于列西爾透明劑)。7500酒精量取75mL酒精、100mL無菌水充分混合均勻。0.1%升汞水稱取。.1g升汞(氯化汞)充分溶解于100mL無菌水中。樣品制備將帶有霉斑部位的線體，用無菌剪刀剪取4cm長的短紗。sx/T0456一95‘內(nèi)產(chǎn)︺L將剪好的樣品放入帶蓋的稱量皿內(nèi)，再放入0.1%升汞水25mL3-5s;立即棄去升汞水。一月卜﹂︺量取25mL75%酒精液放入稱
7、量皿(5.2)內(nèi)1min，立即棄去酒精。只︺用無菌水沖洗樣品(5.3)35次?！甦將未帶霉斑的紗線按5.1,5.2,5.3,5.4同樣方法制備樣品作為空白樣品對照。6檢驗(yàn)步驟6.1用無菌鑷子將制備好的樣品，分別放在虎紅培養(yǎng)基上。6.2將6.1培養(yǎng)平皿放入25-28C恒溫箱內(nèi)培養(yǎng)3-7天。在培養(yǎng)期間要觀察菌落生長狀態(tài)。6.3將6.2培養(yǎng)出的菌落在顯微鏡上觀察，初步鑒定到屬。6.4將6.3不同屬的菌用無菌接種針，分別接種于馬鈴薯培養(yǎng)基和察氏培養(yǎng)基上(青霉屬、曲霉屬接在察氏培養(yǎng)基上)。6.5將6.4培養(yǎng)平皿放入25^28℃恒
8、溫箱內(nèi)培養(yǎng)3-7天，在培養(yǎng)期間要觀察菌落生長狀態(tài)。6.6將6.5培養(yǎng)的單個(gè)菌落用無菌接種針挑取菌株放在載玻片上，然后用滴管吸取少許列西爾透明劑或20%甘油，滴入載玻片的菌株上，蓋上蓋玻片進(jìn)行鏡檢，觀察菌落的形態(tài)特征及細(xì)微結(jié)構(gòu)。了檢驗(yàn)結(jié)果根據(jù)6.6菌落形態(tài)特征及細(xì)微結(jié)構(gòu)結(jié)合檢索表來確定菌名。附加說明:本標(biāo)準(zhǔn)由中華人民共和國國家進(jìn)出口
