分子生物學(xué) 講義(2011-2012-2)

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1、實(shí)驗(yàn)課程教學(xué)講義單位生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院2011-2012學(xué)年度第2學(xué)期專業(yè)生物技術(shù)班級(jí)2009級(jí)3/4/5/6班考試科目分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)任課老師姜立春制定（修改）日期2012年2月20日21分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室使用規(guī)則1.進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室的實(shí)驗(yàn)人員，必須聽從任課教師的安排，班級(jí)干部負(fù)責(zé)和督促安全和衛(wèi)生工作，每個(gè)學(xué)生要嚴(yán)格遵守。2.必須嚴(yán)格執(zhí)行儀器設(shè)備運(yùn)行記錄制度，記錄儀器運(yùn)行狀況、使用時(shí)間及使用人員等。發(fā)現(xiàn)儀器有故障者，有義務(wù)立即向認(rèn)可老師、管理員或?qū)嶒?yàn)室主任報(bào)告，嚴(yán)禁擅自處理、拆卸、調(diào)整儀器主要部件，凡自行拆卸者一經(jīng)發(fā)

2、現(xiàn)將給予嚴(yán)重處罰。儀器用后切斷電源，各種按鈕回到原位，并做好清潔工作。3.實(shí)驗(yàn)室公用物品用完之后按原樣放回，不得擅自借出或帶出到其它實(shí)驗(yàn)室。在確實(shí)需要的情況下，應(yīng)向?qū)嶒?yàn)室管理人員提出請(qǐng)求。4.使用易燃易爆氣體時(shí)，盛裝氣體的氣瓶應(yīng)與實(shí)驗(yàn)室相應(yīng)設(shè)施隔離。使用電爐、酒精燈等要遠(yuǎn)離化學(xué)易燃物品。5.所有實(shí)驗(yàn)室存儲(chǔ)的樣品、試劑必須如實(shí)寫好標(biāo)簽，如樣品應(yīng)有樣品名稱、存放時(shí)間、存放人。配制的試劑應(yīng)有試劑名稱、濃度、配制時(shí)間和配制人等。6所有在實(shí)驗(yàn)室冰箱或冰柜里存放的物品用完后需及時(shí)處理。實(shí)驗(yàn)室管理人員將定期清理無標(biāo)識(shí)和過期

3、的樣品。7.實(shí)驗(yàn)室使用有毒物質(zhì)或進(jìn)行能產(chǎn)生有危害氣體的實(shí)驗(yàn)，應(yīng)在不燃結(jié)構(gòu)的通風(fēng)櫥內(nèi)進(jìn)行。8.實(shí)驗(yàn)過程所產(chǎn)生的感染性培養(yǎng)物、菌株及相關(guān)生物制品及其它具感染性實(shí)驗(yàn)室廢棄物，應(yīng)視為醫(yī)療垃圾進(jìn)行相應(yīng)的特定處理。9.帶有放射性的廢棄物必須放入指定的具有明顯標(biāo)志的容器內(nèi)封閉保存，報(bào)有關(guān)部門統(tǒng)一處理。10.實(shí)驗(yàn)室內(nèi)禁止吸煙、用餐，保證通風(fēng)潔凈，閑雜人員不得入內(nèi)。11.實(shí)驗(yàn)工作完畢后，做好整理工作，關(guān)閉電源、水源、氣源和門窗。12.實(shí)驗(yàn)室人員應(yīng)保證消防通道暢通，消防設(shè)施齊全。如發(fā)生意外事故，應(yīng)立即采取必要措施，并及時(shí)報(bào)告實(shí)驗(yàn)

4、室負(fù)責(zé)人、值班人員和報(bào)警。儀器使用注意事項(xiàng)分子生物學(xué)操作中會(huì)涉及一系列儀器，使用不當(dāng)導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)失敗、減少儀器使用壽命或損壞儀器。因此在進(jìn)行操作前細(xì)致地了解各種儀器的使用方法及注意事項(xiàng)，是使后繼實(shí)驗(yàn)事半功倍的一個(gè)必要準(zhǔn)備。冷凍離心機(jī)低溫分離技術(shù)是分子生物學(xué)研究中必不可少的手段。基因片段的分離、酶蛋白的沉淀和回收以及其它生物樣品的分離制備實(shí)驗(yàn)中，都離不開低溫離心技術(shù)，因此低溫冷凍離心機(jī)已成為分子生物學(xué)研究中必需的重要工具。使用方法：1.離心機(jī)應(yīng)放置在水平堅(jiān)固的地板或平臺(tái)上，并力求使機(jī)器處于水平位置以免離心時(shí)造成機(jī)器

5、震動(dòng)。2.打開電源開關(guān)，按要求裝上所需的轉(zhuǎn)頭，將預(yù)先以托盤天平平衡好的樣品放置于轉(zhuǎn)頭樣品架上（離心筒須與樣品同時(shí)平衡），關(guān)閉機(jī)蓋。3.21按功能選擇鍵，設(shè)置各項(xiàng)要求：溫度、速度、時(shí)間、加速度及減速度，帶電腦控制的機(jī)器還需按儲(chǔ)存鍵，以便記憶輸入的各項(xiàng)信息。4.按啟動(dòng)鍵，離心機(jī)將執(zhí)行上述參數(shù)進(jìn)行運(yùn)作，到預(yù)定時(shí)間自動(dòng)關(guān)機(jī)。5.待離心機(jī)完全停止轉(zhuǎn)動(dòng)后打開機(jī)蓋，取出離心樣品，用柔軟干凈的布擦凈轉(zhuǎn)頭和機(jī)腔內(nèi)壁，待離心機(jī)腔內(nèi)溫度與室溫平衡后方可蓋上機(jī)蓋。注意事項(xiàng)：1.機(jī)體應(yīng)始終處于水平位置，外接電源系統(tǒng)的電壓要匹配，并要求

6、有良好的接地線。2.開機(jī)前應(yīng)檢查轉(zhuǎn)頭安裝是否牢固，機(jī)腔有無異物掉入。3.樣品應(yīng)預(yù)先平衡，使用離心筒離心時(shí)離心筒與樣品應(yīng)同時(shí)平衡。4.揮發(fā)性或腐蝕性液體離心時(shí)，應(yīng)使用帶蓋的離心管，并確保液體不外漏，以免腐蝕機(jī)腔或造成事故。5.擦拭離心機(jī)腔時(shí)動(dòng)作要輕，以免損壞機(jī)腔內(nèi)溫度感應(yīng)器。6.每次操作完畢應(yīng)作好使用情況記錄，并定期對(duì)機(jī)器各項(xiàng)性能進(jìn)行檢修。7.離心過程中若發(fā)現(xiàn)異?，F(xiàn)象，應(yīng)立即關(guān)閉電源，報(bào)請(qǐng)有關(guān)技術(shù)人員檢修。附：相對(duì)離心力與每分鐘轉(zhuǎn)速的換算離心機(jī)的轉(zhuǎn)速，在以前實(shí)驗(yàn)資料中一般以每分鐘多少轉(zhuǎn)來表示。由于離心力不僅為轉(zhuǎn)

7、速函數(shù)，亦為離心半徑的函數(shù)，即轉(zhuǎn)速相同時(shí)，離心半徑越長(zhǎng)，產(chǎn)生的離心力越大。因此僅以轉(zhuǎn)速表達(dá)離心力是不夠科學(xué)的，近年來主張用相對(duì)離心力（RCF）來表示比較合理?，F(xiàn)在國(guó)際資料中，已改用相對(duì)離心力來表示。兩者的互換公式如下：N=RCF×105/1.18×RRCF=0.00001118×R×N2N表示轉(zhuǎn)速，單位為轉(zhuǎn)/分（r/min）；R表示離心半徑，即離心管底端至軸心的距離，單位為厘米（cm）；RCF表示相對(duì)離心力，單位用重力加速度Xg(g=9.8m/s2)。電泳儀：電泳技術(shù)是分子生物學(xué)研究不可缺少的重要分析手段。電

8、泳一般分為自由界面電泳和區(qū)帶電泳兩大類，自由界面電泳不需支持物，如等電聚焦電泳、等速電泳、密度梯度電泳及顯微電泳等，這類電泳目前已很少使用。而區(qū)帶電泳則需用各種類型的物質(zhì)作為支持物，常用的支持物有濾紙、醋酸纖維薄膜、非凝膠性支持物、凝膠性支持物及硅膠-G薄層等，分子生物學(xué)領(lǐng)域中最常用的是瓊脂糖凝膠電泳。所謂電泳，是指帶電粒子在電場(chǎng)中的運(yùn)動(dòng)，不同物質(zhì)由于所帶電荷及分子量的不同，因此在電場(chǎng)中運(yùn)動(dòng)速度不同