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1、李中閱票研久i學(xué)i報(bào)tyJournalofChinaPharmaceuticalUnivers2005,36(6):543一545澳甲酚綠法測(cè)定殼聚糖的含量鄭鐵生“，王亞娜2，宗愛(ài)萍“(’江蘇大學(xué)醫(yī)學(xué)技術(shù)學(xué)院，鎮(zhèn)江212001;z鎮(zhèn)江科力生物技術(shù)有限公司，鎮(zhèn)江212001)【關(guān)鍵詞】分光光度測(cè)定法;澳甲酚綠法;殼聚糖;含量側(cè)定【中圖分類(lèi)號(hào)】8917【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A【文章編號(hào)】100(〕一5048(2005)06一0543一。殼聚糖(chitosan)是由氨基葡萄糖和N一乙酞基殼聚糖樣品取待測(cè)殼聚糖(鎮(zhèn)江科力生物技葡萄糖通過(guò)
2、件1,4一糖昔鍵連接起來(lái)的直鏈多糖，在術(shù)有限公司))0.500g，用0.167moUL乙酸溶液定容醫(yī)藥、食品、日化、環(huán)保等領(lǐng)域具有廣泛的應(yīng)用前至100ML.景川，己成為相關(guān)領(lǐng)域研究的熱門(mén)課題。目前，測(cè)10歲L殼聚糖標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)存溶液稱(chēng)取殼聚糖(生定殼聚糖含量的方法有:酸水解間接比色法[[2l、滴化試劑級(jí)，上海源聚生物科技有限公司，脫乙酞度定法[3,4〕和分光光度法〔5,61。酸水解間接比色法操大于90%)1.000g，用0.167mol/L乙酸溶液定容作比較繁瑣，且不適于微量樣品的分析。滴定法可至100mLa分為酸堿滴定法〔’〕
3、和水解滴定法叫，酸堿滴定法以5歲L殼聚糖標(biāo)準(zhǔn)溶液配制稱(chēng)取殼聚糖(生甲基橙作指示劑，方法簡(jiǎn)單，但由于是膠體溶液，因化試劑級(jí)，上海源聚生物科技有限公司，脫乙酞度此終點(diǎn)時(shí)變色不明顯，且易產(chǎn)生沉淀，干擾測(cè)定;水大于90%)0.500g，用0.167mol/L乙酸溶液定容解滴定法樣品需水解20min，滴定要求高，操作煩至100MLa瑣，且不適合微量樣品的分析。分光光度法用茜素10mmol/LBCG儲(chǔ)存溶液稱(chēng)取BCG(分析紅[51或鋅試劑困與殼聚糖在一定酸度條件下的顯級(jí)，M,720.02Da)1.800g，溶于1mol/LNaOH溶液
4、色反應(yīng)廁定殼聚糖的含量，但測(cè)定的線性范圍只有5mL中，用蒸餾水定容至250mLo0一0.2mg/mL，且色素會(huì)吸附比色杯。0.05%菌霉克星〔'IPK-PO401(鎮(zhèn)江科力生物技澳甲酚綠(bromocresolgreen,BCG)是一種用于測(cè)術(shù)有限公司)儲(chǔ)存液取PK-PO4010.05mL，用蒸定血清白蛋白的試劑[71，作為多糖分析試劑的研究，餾水定容至100ML.目前尚未見(jiàn)文獻(xiàn)報(bào)道。本文利用BCG與殼聚糖的0.083mol/L聚氧乙烯)35一十二烷基醚(Brij-特異性顯色反應(yīng)，其復(fù)合物在620nm處吸收值的變35)儲(chǔ)存
5、液稱(chēng)取Brij-351g，溶于蒸餾水8mL中，化與殼聚糖含量成線性關(guān)系的特點(diǎn)，建立了一種高加溫助溶，冷卻后加蒸餾水至10MLo選擇性、高靈敏度簡(jiǎn)便快速測(cè)定殼聚糖含量的方法。0.02mmol/LBCG應(yīng)用溶液在100ML的量1材料瓶?jī)?nèi)加蒸餾水約40ML,pH值為4.4的醋酸一醋酸1.1儀器鈉緩沖液10ML，精確加人BCG儲(chǔ)存液2.0mL，加722分光光度計(jì)(上海第三分析儀器廠);UV-菌霉克星PK-PO401儲(chǔ)存液0.25mL,Brij-35儲(chǔ)存液210紫外分光光度計(jì)(日本島津);電子自動(dòng)天平1.25mL，加蒸餾水定容。(上
6、海天平儀器廠)。1.3實(shí)驗(yàn)方法1.2試劑取3支試管，分別加入0.167mol/L醋酸，0.167mol/L乙酸溶液稱(chēng)取乙酸(分析純，上5盯】殼聚糖標(biāo)準(zhǔn)溶液以及待測(cè)樣品溶液1.0ML,海化學(xué)試劑有限公司)1g，用蒸餾水定容至100再各加人BCG應(yīng)用溶液2.0mLo3管分別為空白ML.管、標(biāo)準(zhǔn)管和測(cè)定管?！臼崭迦掌凇?005-06-29【‘通訊作者】Tel:0511一5039779E-mail:jsdxzts@163.com中閱票科大李學(xué)報(bào)JournalofChinaPharnutceuticalUniversity第36卷各
7、管于37℃水浴5min，用722型分光光度度。結(jié)果表明，pH4.4時(shí)反應(yīng)體系溶液在620nm計(jì)，在620nn處以空白管調(diào)零，分別測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)管和處吸收度最高(圖2B).測(cè)定管的吸收度。0.52結(jié)果與討論0.40.3叫2.1吸收光譜曲線0.2圖1是不同殼聚糖濃度下，BCG-殼聚糖復(fù)合0.1一00物在400一800nm間掃描得到的吸收光譜圖。結(jié)13名20名27刀34.641.248.43.84.0424灘4.64名5.05.2('=,;;/(mmol.L-1pH果表明，當(dāng)向BCG中加人殼聚糖時(shí)，隨著殼聚糖濃一.-Control;一
8、▲-sample度增大，425run處吸收峰逐漸降低，在620rim處吸Fig.2A:EffectsofBrij-35concentrationsontheabsor)anceofBCG-收峰不斷升高，反應(yīng)體系由黃色變成綠色并逐漸加chitosan;B:EffectsofpHonofabsorbance
