資源描述：
《SNT2143-2008進(jìn)出口食品中隱孢子蟲(chóng)檢測(cè)方法PCR法.pdf》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線(xiàn)閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫(kù)。
1、版權(quán)所有·禁止翻制、電子傳閱、發(fā)售中華人民共和國(guó)出入境檢驗(yàn)檢疫行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)犛犖／犜２１４３—２００８進(jìn)出口食品中隱孢子蟲(chóng)檢測(cè)方法犘犆犚法犇犲狋犲狉犿犻狀犪狋犻狅狀狅犳犆狉狔狆狋狅狊狆狅狉犻犱犻狌犿犻狀犳狅狅犱犳狅狉犻犿狆狅狉狋犪狀犱犲狓狆狅狉狋—犘犆犚犿犲狋犺狅犱２００８０９０４發(fā)布２００９０３１６實(shí)施中華人民共和國(guó)發(fā)布國(guó)家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局版權(quán)所有·禁止翻制、電子傳閱、發(fā)售犛犖／犜２１４３—２００８前言本標(biāo)準(zhǔn)的附錄Ａ為規(guī)范性附錄。本標(biāo)準(zhǔn)由國(guó)家認(rèn)證認(rèn)可監(jiān)督管理委員會(huì)提出并歸口。本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：中華人民共和國(guó)上海出入境檢驗(yàn)檢疫局。本標(biāo)準(zhǔn)主
2、要起草人：李曉虹、閆東麗、韓偉。本標(biāo)準(zhǔn)是首次發(fā)布的出入境檢驗(yàn)檢疫行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)。Ⅰ版權(quán)所有·禁止翻制、電子傳閱、發(fā)售犛犖／犜２１４３—２００８進(jìn)出口食品中隱孢子蟲(chóng)檢測(cè)方法犘犆犚法１范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了食品中隱孢子蟲(chóng)的ＰＣＲ檢驗(yàn)方法。本標(biāo)準(zhǔn)適用于果汁、牛奶、葉類(lèi)蔬菜及水果、貝殼類(lèi)中隱孢子蟲(chóng)的快速檢驗(yàn)。２規(guī)范性引用文件下列文件中的條款通過(guò)本標(biāo)準(zhǔn)的引用而成為本標(biāo)準(zhǔn)的條款。凡是注日期的引用文件，其隨后所有的修改單（不包括勘誤的內(nèi)容）或修訂版均不適用于本標(biāo)準(zhǔn)，然而，鼓勵(lì)根據(jù)本標(biāo)準(zhǔn)達(dá)成協(xié)議的各方研究是否可使用這些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本適
3、用于本標(biāo)準(zhǔn)。ＧＢ／Ｔ５７５０．１２生活飲用水標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)方法微生物指標(biāo)ＧＢ／Ｔ６６８２分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和實(shí)驗(yàn)方法（ＧＢ／Ｔ６６８２—２００８，ＩＳＯ３６９６：１９８７）ＳＮ／Ｔ１１９３基因檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室技術(shù)要求３定義、術(shù)語(yǔ)和縮略語(yǔ)下列術(shù)語(yǔ)、定義和縮略語(yǔ)適用于本標(biāo)準(zhǔn)。３．１定義和術(shù)語(yǔ)３．１．１隱孢子蟲(chóng)犮狉狔狆狋狅狊狆狅狉犻犱犻狌犿隱孢子蟲(chóng)為頂端復(fù)合體門(mén)、孢子蟲(chóng)綱、球蟲(chóng)亞綱、真球蟲(chóng)目、艾美球蟲(chóng)亞目、隱孢子蟲(chóng)科、隱孢子蟲(chóng)屬。是直徑在（３．２）×（８．０）的極微小的，無(wú)法以肉眼辨識(shí)的單細(xì)胞寄生蟲(chóng)。μｍ～５．１μｍμｍ～８．５μｍ隱孢子蟲(chóng)寄生于人或動(dòng)物的胃腸
4、道上皮和呼吸道上皮微絨毛，其隱孢子蟲(chóng)病是一種重要的人畜共患寄生蟲(chóng)病。感染多經(jīng)過(guò)食源性或水源性傳播途徑感染。目前公認(rèn)的隱孢子蟲(chóng)有效種為１３個(gè)種。其中感染人最主要的是微小隱孢子蟲(chóng)（犆．狆犪狉狏狌犿）。３．２縮略語(yǔ)３．２．１犐犕犛犻犿犿狌狀狅犿犪犵狀犲狋犻犮狊犲狆犪狉犪狋犻狅狀免疫磁珠分離。３．２．２犚犉犔犘犚犲狊狋狉犻犮狋犻狅狀犉狉犪犵犿犲狀狋犔犲狀犵狋犺犘狅犾狔犿狅狉狆犺犻狊犿限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性分析。４設(shè)備和材料４．１電子天平：感量為０．００１ｇ。４．２顯微鏡：×１００倍。４．３離心機(jī)：３０００ｒ／ｍｉｎ。４．４恒溫水浴鍋：３６℃±１℃，６５
5、℃±１℃。４．５ＰＣＲ擴(kuò)增儀。１版權(quán)所有·禁止翻制、電子傳閱、發(fā)售犛犖／犜２１４３—２００８４．６電泳儀。４．７磁極和混勻器。４．８微波爐。４．９紫外檢測(cè)儀或凝膠成像系統(tǒng)。４．１０微量可調(diào)移液器：１０μＬ，１００μＬ，２００μＬ，１０００μＬ。４．１１ＦＴＡ卡（Ｗｈａｔｍａｎ公司或同類(lèi)產(chǎn)品）。４．１２直徑６ｍｍ打孔機(jī)（Ｗｈａｔｍａｎ公司或同類(lèi)產(chǎn)品）。４．１３振蕩器。４．１４搖床。４．１５過(guò)濾均質(zhì)袋（４００ｍＬ）（法國(guó)犐狀狋犲狉狊犮犻犲狀犮犲，ＳｔＮｏｍ公司或同類(lèi)產(chǎn)品）。５試劑除另有規(guī)定外，試劑為分析純或生化試劑，水為滅菌雙蒸水。５．１抗隱孢子
6、蟲(chóng)磁珠試劑盒（丹麥Ｄｙｎａｌ公司或同類(lèi)產(chǎn)品）。５．２ＤＮＡ抽提試劑盒。５．３２×犜犪狇ＰＣＲＭａｓｔｅｒＭｉｘ［０．１Ｕ犜犪狇Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ／μＬ、５００μｍｏｌ／ＬｄＮＴＰｅａｃｈ、２０ｍｍｏｌ／ＬＴｒｉｓＨＣｌ（ｐＨ８．３）、１００ｍｍｏｌ／ＬＫＣｌ、３ｍｍｏｌ／ＬＭｇＣｌ２、其他穩(wěn)定劑和增強(qiáng)劑］：北京天為時(shí)代公司或同類(lèi)產(chǎn)品。５．４１００ｂｐＤＮＡｍａｒｋｅｒ。５．５１０ｍｍｏｌ／ＬＴｒｉｓＨＣｌ。５．６０．１ｍｍｏｌ／ＬＥＤＴＡ（ｐＨ８．０）。５．７瓊脂糖。５．８溴化乙錠。５．９引物：見(jiàn)表１。表１隱孢子蟲(chóng)引物序列及擴(kuò)增片段長(zhǎng)度
7、ＰＣＲ擴(kuò)增引物名稱(chēng)引物序列（５′３′）擴(kuò)增片段大小／ｂｐＰｒｉｍａｒｙＥｘＣｒｙｌＦａＴＴＣＴＡＧＡＧＣＴＡＡＴＡＣＡＴＧＣＧＰＣＲＥｘＣｒｙ２ＲｂＣＣＣＡＣＴＴＣＴＴＣＧＡＡＧＣＡＧＧＡ１３３０ＮｅｓｔｅｄＮｅｓＣｒｙ３ＦａＧＧＡＡＧＧＧＴＴＧＴＡＴＴＴＡＴＴＡＧＡＴＡＡＡＧＰＣＲＮｅｓＣｒｙ４ＲｂＣＴＣＡＴＡＡＧＧＴＧＣＴＧＡＡＧＧＡＧＴＡ８３０注：Ｆａ為Ｆｏｒｗａｒｄ（正向），Ｒｂ為Ｒｅｖｅｒｓｅ（反向）。５．１０ＦＴＡ純化試劑：Ｗｈａｔｍａｎ公司或同類(lèi)產(chǎn)品。５．１１ＦＴＡ卡洗液ＴＥｂｕｆｆｅｒ：０．０１ｍｏｌ／ＬＴｒｉｓＨＣｌ，ｐ
8、Ｈ８．０；０．１ｍｍｏｌ／ＬＥＤＴＡ，Ｗｈａｔｍａｎ公司或同類(lèi)產(chǎn)品。５．１２１％ＢＳＡ（牛血清白蛋白）。５．１３０．１ｍｏｌ／Ｌ鹽酸（ＨＣｌ）。５．１４１ｍｏｌ／Ｌ
