一種膠原蛋白寡肽對人皮膚成纖維細(xì)胞增殖及膠原分泌的影響

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1、第3O卷第2期成都大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版)V01．30No．22011年6月JournalofChengduUniversity(NaturalScienceEdition)Jun．20l1文章編號：1004—5422(2011)02—0102—02一種膠原蛋白寡肽對人皮膚成纖維細(xì)胞增殖及膠原分泌的影響宋芹，陳封政，顏軍，郭曉強(qiáng)，鄔曉勇，姚倩，茍小軍(成都大學(xué)中藥化學(xué)實驗室，四川成都610106)摘要：研究了羅非魚魚鱗膠原蛋白寡肽對體外培養(yǎng)人皮膚成纖維細(xì)胞增殖與I型膠原蛋白分泌的影響．采用wSI一_8法測定了膠原蛋白寡肽對人皮膚成纖維細(xì)胞增殖的影響，采用EIJSA法檢測了膠原蛋白寡肽對人皮膚

2、成纖維細(xì)胞I型膠原蛋白分泌的影響．實驗表明，羅非魚魚鱗膠原蛋白寡肽能促進(jìn)人皮膚成纖維細(xì)胞增殖(P<0．01)，以及人皮膚成纖維細(xì)胞I型膠原蛋白的分泌(P<0．01)．關(guān)鍵詞：膠原蛋白寡肽；人皮膚成纖維細(xì)胞；增殖；I型膠原蛋白分泌中圖分類號：TS59文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A蘿酶的復(fù)合酶進(jìn)行酶解，得平均分子量約為920Da0引言的膠原蛋白寡肽．取CP適量，溶解于PBS緩沖液膠原蛋白，又稱膠原，是真皮的主要組成成分，中，分別制成濃度為15、30、60,g／nm的溶液，溶液經(jīng)也是構(gòu)成細(xì)胞外基質(zhì)的主要成分．由于膠原蛋白分0．22vm微孑L濾膜濾過除菌，備用．子中含有大量的酰胺基團(tuán)和羥基，具有較強(qiáng)的吸濕2．2人

3、皮膚成纖維細(xì)胞培養(yǎng)性能而使皮膚保持飽滿充盈nJ．目前，研究人員開人皮膚成纖維細(xì)胞于MEM培養(yǎng)基(含5％胎牛始利用生物技術(shù)從動物真皮或魚鱗中提取膠原蛋白血清)在濃度5％、濕度95％、恒溫37℃的C02培養(yǎng)寡肽，并將其用作化妝品的原料或添加劑_3]．本實箱中培養(yǎng)．每3d換液1次，5—6d細(xì)胞基本融合后驗將采用體外細(xì)胞培養(yǎng)模型，探討膠原蛋白寡肽對傳代．吸去原培養(yǎng)基，用PBS溶液清洗2次，加人0．人皮膚成纖維細(xì)胞的增殖及工型膠原合成的影響．25％Trypsin．1mMEDTA·4Na溶液0．5mL，37oC消化0．5min后，于顯微鏡下可見細(xì)胞胞體收縮、變圓，加1材料、試劑與儀器MEM培養(yǎng)基10m

4、L終止消化．輕輕反復(fù)吹打細(xì)胞，實驗所用的材料、試劑與儀器包括：羅非魚干燥使其浮游，移至50mL離心管，速度2×103rpm，2魚鱗(海南水產(chǎn)品市場)，人皮膚成纖維細(xì)胞(日本北min離心，吸去上清液，加入適量含血清培養(yǎng)基，輕海道大學(xué)齒科研究室)；aMEM培養(yǎng)基(美國GIBCO輕吹打，使管底細(xì)胞浮游，均勻分散．取96孔板，按公司)，胎牛血清(美國GIBCO公司)，青鏈霉素雙抗每孔1×103個播種細(xì)胞．待細(xì)胞附著后，各組中分(美國Invitrogen公司)，Trypanbluesolution(美國Sig—別加入15、30、60ug／mLCP溶液lO，并以加人相l(xiāng)na公司，Lot．No076K2

5、331)，0．25％Trypsin—lmMED—同體積PBS緩沖液作為空白對照組．TA·4Naliquid(美國Invitrogen公司)，DMSO(美國Sig—2．3WST-8法測定細(xì)胞數(shù)ma公司)；細(xì)胞數(shù)測定試劑盒WST-8kit(日本等人皮膚或纖維細(xì)胞按“2．2”項下方法培養(yǎng)72h化學(xué)株式會社)，Infinite500全自動酶標(biāo)儀(瑞士Te—后，從培養(yǎng)箱中取出96孔板，向各孔中加入WST-8carl公司)，膠原蛋白試劑盒(Sircol(tm)SolubleColla—溶液l0，重新放回c()2培養(yǎng)箱中孵育，進(jìn)行顯色genAssay，英國bioeolor公司)．反應(yīng)．4h后取出，在45

6、0nln下測定OD值．所有數(shù)據(jù)2方法與結(jié)果以±s表示，采用SPSS11．0ForWindows統(tǒng)計軟件2。1膠原蛋白寡肽(collagenpeptid，CP)的制備對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)處理．樣品問差異比較用t檢驗．取羅非魚魚鱗經(jīng)HC1脫鈣后，采用木瓜酶和菠P<0．05表示有統(tǒng)計學(xué)差異，結(jié)果如表1所示．收稿日期：2011—01—15．作者簡介：宋芹(1982一)，女，博士，講師，從事天然產(chǎn)物研究與開發(fā)．第2期宋芹，等：一種膠原蛋白寡肽對人皮膚成纖維細(xì)胞增殖及膠原分泌的影響．103．表1膠原蛋白寡肽對人皮膚成纖維細(xì)胞高于空白組，約為空一白一{組∞量的州Ⅲ3啦倍隧毯．增殖的影響wSr．8(±s)咖瑚

7、㈣湖蚴瑚m03討論本實驗采用羅非魚魚鱗水解制備膠原寡肽，平均分子量為920Da，其中1O個氨基酸以下的寡肽約占50％，三肽約占12％．通過體外培養(yǎng)人皮膚成纖注：*P<0．05。**P<0．01v8normalcontrol維細(xì)胞實驗結(jié)果顯示，酶解得到的膠原蛋白寡肽對表1數(shù)據(jù)表明：人皮膚成纖維細(xì)胞的增殖活性人皮膚成纖維細(xì)胞具有促增殖和促進(jìn)I型膠原蛋白明顯強(qiáng)于空白對照組，說明CP對體外培養(yǎng)人皮膚分泌的作用．這也證明，利用膠原