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《中性β甘露聚糖酶產(chǎn)生菌的分離篩選及其產(chǎn)酶條件研究》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、中性R-甘露聚糖酶產(chǎn)生菌的分離篩選及其產(chǎn)酶條件研究陳一平龍健兒廖連華(中國科學(xué)院成都生物研究所，成都610041)摘要從土堆中分離列9株產(chǎn)生p一甘東采掩璐的芽抱桿藺(Bacilussp.)oBacilwp.M50250.1,三角瓶搖瓶培養(yǎng)試臉，以4%的魔芋粉為破源，1。%(NH,),S0,為致海，0.35%N%CO=30--343;培養(yǎng)60h產(chǎn)吟達(dá)到高峰。醉活力為180-200u/mLo1001,雄發(fā)肆，以2%魔芋粉為破派，在30-329:,1:0.75v/v/.通氣-',200dmin條件下，發(fā)嘴液璐活力最高可達(dá)330.44.
2、/.L.璐的最適反應(yīng)滋度和pH分別為50℃和6.0，低于50T,pH5.0一7.0膝德定。Fe",AI",EDTA,Hg'’對璐有抑制作用，而Be'‘,M.'’對陣有激活作用。A一甘露聚糖酶印一1,4-D-mannanmannohydrolase,EC3.2.1.78)是一種降解甘露聚糖、葡萄甘露聚糖、半乳甘露聚糖和半乳葡萄甘露聚糖的主鏈p一1,4-D一甘露毗喃搪昔鍵的酶。自50年代以來，微生物產(chǎn)生的p一甘露聚糖酶陸續(xù)被發(fā)現(xiàn)和報道。近年來，隨著對自然界第二大植物多糖資源一半纖維素的開發(fā)以及具有上述結(jié)構(gòu)的植物多糖的酶解產(chǎn)物藥用價值
3、和保健功能的發(fā)現(xiàn)，為該醉在食品、醫(yī)藥、飼料、造紙、紡織等領(lǐng)域的應(yīng)用開辟了廣闊的前景。功能性低聚搪是當(dāng)今世界保健品的主流產(chǎn)品。我國目前功能性低聚糖品種不多，以高科技為背景的新功能性低聚糖的開發(fā)應(yīng)用已成為生物技術(shù)領(lǐng)域研究的新熱點，而新型功能性低聚搪的開發(fā)有賴于酶學(xué)性質(zhì)優(yōu)良的產(chǎn)酶菌株的分離和篩選。中性p一甘露聚糖醉產(chǎn)生菌的分離、篩選和酶學(xué)性質(zhì)的研究，可以有效地開發(fā)我國豐富的魔芋資源。1材料和方法1.1菌株供試菌株Bacillussp.M，系從四川大竹、安縣等地采集的土樣中分離得到。1.2培養(yǎng)基和培養(yǎng)方法1.2.1富集培養(yǎng)基:魔芋粉20
4、g,凡HPO,"3H,O0.5g，土壤浸提液100ML,pH7.2，加水至1L.1.2.2分離培養(yǎng)基:魔芋粉5g，蛋白膝log，酵母青2g,MgCl,"6H,00.2g,K,HPO,"3H,Olg,瓊脂粉15g,pH7.2，加水至IL.1.2.3發(fā)酵培養(yǎng)基:魔芋粉20g,醉母膏4.0g,(N氏),SO46.0g,Na,HI獄"12從04.0g,KH,PO,2.0g,CaC1,3.Og,MgCl,"6H,00.6g,Na,C幾3.5g,CoCI,-6氏00.01g,MnCl,"4姚01.0g,(礦物鹽類和磷酸鹽分開滅菌)pH7.0
5、一7.2，加水至1L.2.4培養(yǎng)方法:250mL三角瓶裝30mL發(fā)醉培養(yǎng)基，200r/min,30℃恒溫旋轉(zhuǎn)振蕩培養(yǎng)60h.醉活力測定R一甘露聚糖酶活力測定:吸取0AmL1.0%(w/v)角豆膠溶液(以pH6.0,0.05mol/LNa,HP04.12Hi0一0.25m1幾檸棣酸緩沖液配制)，加人0.1mL經(jīng)適當(dāng)稀釋的粗酶液，50℃水浴反應(yīng)5min后，DNS法測定酶解液的還原糖基含量。酶活力單位定義:在上述反應(yīng)條件下，每分鐘釋放lpmol相當(dāng)于D一甘露糖的還原搪基所需的酶量為一個酶活力單位(a).1.4菌體濃度瀏定發(fā)酵液以0.8
6、%NaCl溶液適當(dāng)稀釋后，721分光光度計測660nm處的吸收值。981.5菌種鑒定根據(jù)《一般細(xì)菌常用鑒定方法》和Berger'，細(xì)菌鑒定手冊第八版對供試菌株屬的特征進行鑒定。2結(jié)果2.1產(chǎn)酶菌株的初篩將采集的土樣，分別用富集培養(yǎng)基30℃振蕩富集培養(yǎng)7a，富集液經(jīng)80℃熱處理10min,稀釋法分離，在形成單菌落的平皿中，以WilliamsAG.報道的多糖染料和多糖底物反應(yīng)生成透明圈檢測半纖維素降解菌的方法，用游標(biāo)卡尺分別測量菌落直徑(C)和透明圈直徑(H)，經(jīng)初篩得到H/C>I共68株菌。2.2產(chǎn)酶菌株的復(fù)師采用發(fā)酵產(chǎn)酶培養(yǎng)基，
7、用上述發(fā)酵產(chǎn)酶培養(yǎng)方法進行復(fù)篩。經(jīng)初篩得到的68株菌進行發(fā)醉產(chǎn)酶試驗，測定酶活力，得到9株胞外p一甘露聚搪酶產(chǎn)生菌。其中菌株Mm具有產(chǎn)酶時間短，產(chǎn)酶穩(wěn)定等特性，將其作為試驗研究菌株。結(jié)果如表2.衰Zp一甘，取姍醉產(chǎn)生藺的篩選T.Aln2S-gpn1npOf一........Drodufl-bacteriaStrainH/CValues日一Maunaaeseactivity/(u/mL)8一5,3.71108.5614一82.758.9521一1.2.54120.1421一1,(MI.)2.21108.4421一21.7883.4
8、626一幾1.25139.8530一1,2.00132.4230一121.78103.2430一41.7438.412.3菌林Bacillussp.M、產(chǎn)生R一甘落聚槍酶的條件2.3.1不同碳源對產(chǎn)酶的影響:改變產(chǎn)酶培養(yǎng)基中碳源的種類和濃度，進行發(fā)酵產(chǎn)酶試驗，結(jié)
