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《應(yīng)用siRNA技術(shù)下調(diào)survivin基因表達(dá)以增強(qiáng)SGC7901胃癌細(xì)胞對順鉑的敏感性》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫。
1、應(yīng)用siRNA技術(shù)下調(diào)survivin基因表達(dá)以增強(qiáng)SGC7901胃癌細(xì)胞對順鉑的敏感性【摘要】目的利用小干擾RNA(siRNA)技術(shù)特異性下調(diào)survivin基因的表達(dá)，檢測SGC7901胃癌細(xì)胞轉(zhuǎn)染前后對順鉑敏感性的變化。方法實驗分為空白對照組(control組)、單用順鉑組(CDDP組)、脂質(zhì)體組(Lip組)、單用survivinsiRNA組(siRNA組)、轉(zhuǎn)染survivinsiRNA(轉(zhuǎn)染組)及轉(zhuǎn)染survivinsiRNA聯(lián)合順鉑作用組(聯(lián)合作用組)。人工合成survivinsiRNA，通過Lip包裹將siRNA轉(zhuǎn)染胃癌細(xì)胞S
2、GC7901，熒光顯微鏡下觀察轉(zhuǎn)染情況。MTT法檢測各組細(xì)胞的增殖抑制率，Westernblot及免疫細(xì)胞化學(xué)法檢測survivin蛋白的表達(dá)，Hoechst染色觀察細(xì)胞凋亡的形態(tài)改變。結(jié)果Hoechst染色熒光顯微鏡下control組、Lip組及siRNA組細(xì)胞核呈正常的藍(lán)色,而CDDP組、轉(zhuǎn)染組及聯(lián)合作用組細(xì)胞核染色增強(qiáng)、核質(zhì)濃縮、核碎裂,呈凋亡改變;聯(lián)合作用組細(xì)胞增殖抑制率(±)%明顯高于其余各組(P【關(guān)鍵詞】survivin;siRNA;胃癌;順鉑Abstract:ObjectiveTodetectthevariationsinci
3、splatinsensitivityofhumangastriccarcinomacelllineSGC7901beforeandaftertransfectiontospecificallydownregulatetheexpressionofsurvivinggenewithsmallinterferingRNA(siRNA)Thisexperimentisdividedintothecontrolgroup,cisplatingroup(CDDPgroup),lipsomegroup(lipgroup),siRNAgroup,tran
4、sfectiongroupandsiRNAcombinedCDDPgroup(combinedgroup).SurvivinsiRNAwasartificiallysynthesizedandthentransfectedintogastriccancercellswithliposome.Thetransfectioneffectsweredeterminedbyfluorescencemicroscopy.TheinhibitoryrateofcellproliferationwasassayedbyMTT,andtheexpressi
5、onofsurvivinprotEinwasdeterminedbyWesternblotandimmunocytochemicalstaining.ThemorphologicalchangesoftheapoptoticcellswereobservedbyHoechstAsobservedunderthefluorescencemicroscopeafterHoechststaining,thenuclEIpresentedasnormalblueinthecontrolgroup,lipgroupandsiRNAgroup,whil
6、eCDDPgroup,siRNAtransfectiongroupandsiRNAcombinedcisplatingrouphadsuchchangesasreinforcednuclearstaining,karyopyknosisandkaryorrhexiswithapoptoticchanges.TheinhibitionrateofcellproliferationinsiRNAcombinedcisplatingroup(±)%wasmarkedlyhigherthantheothergroups(PKeywords：surv
7、ivin;siRNA;gastriccarcinoma;cisplatin順鉑是目前臨床上最常用的化療藥物之一,其抗腫瘤作用明顯、價格低廉，并且可應(yīng)用于多種腫瘤的化療,但是長期應(yīng)用后極易出現(xiàn)耐受現(xiàn)象，降低其療效,并且隨著劑量的增加，出現(xiàn)的副作用越來越多。有研究表明,長期應(yīng)用順鉑后，某些腫瘤細(xì)胞中出現(xiàn)耐藥現(xiàn)象并且可檢測到存活素(survivin)的高表達(dá)[1]。survivin是近年新發(fā)現(xiàn)的一種凋亡抑制因子，具有強(qiáng)大的抗凋亡功能，屬于凋亡抑制因子(inhibitorofapoptosisproteins，IAP)家族成員之一。survivin
8、與胃癌的定量研究表明，其表達(dá)量與患者的預(yù)后呈負(fù)相關(guān)。分化程度越低的胃癌組織中survivin表達(dá)率越高，患者預(yù)后越差[2]。因此，本實驗通過將人工合成的survivin小干擾RN
