葛根素對(duì)肝硬化大鼠肝臟缺血再灌注損傷保護(hù)作用及其保護(hù)機(jī)制的研究

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1、葛根素對(duì)肝硬化大鼠肝臟缺血再灌注損傷保護(hù)作用及其保護(hù)機(jī)制的研究孫鵬,李五生,張楠,周小娜,劉金龍【摘要】目的觀察葛根素對(duì)肝硬化大鼠肝臟缺血再灌注損傷是否具有保護(hù)作用,及其保護(hù)機(jī)制。方法首先建立大鼠肝硬化動(dòng)物模型,在此模型基礎(chǔ)上建立大鼠全肝缺血再灌注模型,比較用Pue預(yù)處理對(duì)缺血再灌注后,肝組織光鏡下的形態(tài)學(xué)改變;血清中丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶和氧化亞氮、丙二醛含量、超氧化物歧化酶活性,及肝組織中NO、腫瘤壞死因子α、MDA含量、SOD活性變化。結(jié)果Pue預(yù)處理可使大鼠血清NO含量、肝組織NO含量及SOD活性明顯增高;而血清ALT、AST、MDA含量及肝組織TNF-α、MDA含量明

2、顯降低;肝組織形態(tài)損傷也有所減輕。結(jié)論葛根素對(duì)肝硬化大鼠肝缺血再灌注損傷有顯著的保護(hù)作用,其主要機(jī)制是減少NO的降低、擴(kuò)張血管、改善微循環(huán);清除氧自由基、減輕脂質(zhì)過(guò)氧化?!娟P(guān)鍵詞】葛根素;藥物預(yù)處理;缺血再灌注損傷;肝硬化;大鼠現(xiàn)代葛根素對(duì)肝硬化大鼠肝臟缺血再灌注損傷保護(hù)作用及其保護(hù)機(jī)制的研究孫鵬,李五生,張楠,周小娜,劉金龍【摘要】目的觀察葛根素對(duì)肝硬化大鼠肝臟缺血再灌注損傷是否具有保護(hù)作用,及其保護(hù)機(jī)制。方法首先建立大鼠肝硬化動(dòng)物模型,在此模型基礎(chǔ)上建立大鼠全肝缺血再灌注模型,比較用Pue預(yù)處理對(duì)缺血再灌注后,肝組織光鏡下的形態(tài)學(xué)改變;血清中丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶和氧化亞氮

3、、丙二醛含量、超氧化物歧化酶活性,及肝組織中NO、腫瘤壞死因子α、MDA含量、SOD活性變化。結(jié)果Pue預(yù)處理可使大鼠血清NO含量、肝組織NO含量及SOD活性明顯增高;而血清ALT、AST、MDA含量及肝組織TNF-α、MDA含量明顯降低;肝組織形態(tài)損傷也有所減輕。結(jié)論葛根素對(duì)肝硬化大鼠肝缺血再灌注損傷有顯著的保護(hù)作用,其主要機(jī)制是減少NO的降低、擴(kuò)張血管、改善微循環(huán);清除氧自由基、減輕脂質(zhì)過(guò)氧化?!娟P(guān)鍵詞】葛根素;藥物預(yù)處理;缺血再灌注損傷;肝硬化;大鼠現(xiàn)代肝膽外科中避免術(shù)中過(guò)多的出血,及時(shí)而有效地控制出血是手術(shù)成功的關(guān)鍵之一,阻斷肝血流技術(shù)在肝切除術(shù)中被廣泛應(yīng)用。許多肝臟疾病患者往往伴有

4、肝硬化,其硬化肝臟對(duì)缺血的耐受性較差,長(zhǎng)時(shí)間阻斷入肝血流或術(shù)中大出血均可引起I/R損傷而加重處于代償邊緣的肝臟負(fù)擔(dān),導(dǎo)致術(shù)后發(fā)生肝功能衰竭的可能性增大。因此尋找一種對(duì)肝硬化肝臟缺血及再灌注具有保護(hù)作用的藥物及方法具有重要臨床意義。以往采用的缺血預(yù)處理的方法有其缺陷并在臨床應(yīng)用中受到限制,故尋找一種藥物預(yù)處理來(lái)保護(hù)肝組織、減輕I/R損傷具有重要的臨床價(jià)值。以往試驗(yàn)證明葛根素對(duì)正常肝臟及其他多個(gè)組織器官的I/R損傷具有良好的保護(hù)作用。本次試驗(yàn)通過(guò)葛根素預(yù)處理及缺血預(yù)處理對(duì)肝硬化大鼠肝臟I/R損傷保護(hù)作用的對(duì)比,探討葛根素是否對(duì)肝硬化大鼠肝臟的I/R損傷具有保護(hù)作用,并進(jìn)一步研究其作用機(jī)制。1材料

5、與方法動(dòng)物Wastar大鼠200只,體重200~220g,雌雄各半。儀器與試劑奧林巴斯2700全自動(dòng)生化分析儀、DY89-1全自動(dòng)玻璃勻漿機(jī)、ArthosHTⅡ酶標(biāo)儀、SANYOMDF-330型-70℃低溫冰箱、HH21-600型恒溫水浴箱、722分光光度計(jì)。CCl4,瀘州市鑫達(dá)化工有限公司提供,批號(hào)XX0713;食用酒,瀘州市食品廠提供;葛根素注射液哈爾濱三聯(lián)藥業(yè)有限公司提供,批號(hào)050102B;SOD測(cè)定試劑盒,南京建成生物工程研究所提供,黃嘌呤氧化酶法測(cè)定,批號(hào)XX0716;MDA測(cè)定試劑盒,南京建成生物工程研究所提供;TBA法測(cè)定,批號(hào)XX0716;NO測(cè)定試劑盒,南京建成生物工程研

6、究所提供,亞硝酸鹽法測(cè)定,批號(hào)XX0719;TNF-α測(cè)定試劑盒,上海森雄科技實(shí)業(yè)有限公司,雙抗體夾心ABC-ELISA法測(cè)定,批號(hào)XX0719。模型制備及試驗(yàn)方法大鼠肝硬化模型制備經(jīng)大鼠腹部皮下注射CCl4大豆油溶液,前4次劑量為/100g體重60%CCl4大豆油溶液,每隔3天1次,第4次后間隔7天注射第5次,第5次起劑量改為/100g體重40%CCl4大豆油溶液,每隔3天1次,共13次;除注射CCl4當(dāng)日外,每日1次60%食用酒灌胃,乙醇劑量/100g體重;給予正常飲水;以高脂低蛋白飼料喂養(yǎng)。上述操作第6周末停止,繼續(xù)觀察至8周末大鼠肝硬化模型制備成功并趨于穩(wěn)定。第2周起每周末行B超定位

7、肝穿刺病理檢查,8周末挑選肝硬化程度趨于同一水平大鼠128只,繼續(xù)進(jìn)行下面試驗(yàn)。動(dòng)物分組按隨機(jī)數(shù)字表法,將128只大鼠隨機(jī)分為4組,每組再分為4個(gè)時(shí)間亞組,每亞組8只大鼠。4組分別為A組:假手術(shù)組;B組:?jiǎn)渭內(nèi)毖俟嘧⒔M;C組:缺血預(yù)處理組;D組:葛根素預(yù)處理組。4個(gè)時(shí)間亞組分別為a亞組:缺血前時(shí)間亞組;b亞組:缺血再灌注后1h時(shí)間亞組;c亞組:缺血再灌注2h時(shí)間亞組;d亞組:缺血再灌注6h時(shí)間亞組。缺血再灌

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