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《骨形態(tài)發(fā)生蛋白7在慢性hbv感染者肝組織中的表達(dá)》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、骨形態(tài)發(fā)生蛋白7在慢性HBV感染者肝組織中的表達(dá)：丁芹,馬會(huì)慧,崇雨田,楊紹基【摘要】【目的】通過對不同慢性乙型肝炎病毒（HBV）感染者肝組織中骨形態(tài)發(fā)生蛋白7（BMP-7）表達(dá)的分析，初步探討B(tài)MP-7在肝臟炎癥和肝細(xì)胞再生過程中可能發(fā)揮的作用?！痉椒ā繉?6例慢性HBV感染者及5例正常對照肝組織進(jìn)行常規(guī)組織學(xué)觀察，按病理診斷分組。其中病毒性肝炎乙型慢性輕度12例，中度12例，重度6例，重型8例，乙肝肝硬化10例，肝癌8例。進(jìn)行BMP-7的免疫組織化學(xué)染色，觀察光鏡下分布特點(diǎn)，取部分標(biāo)本進(jìn)行圖像分析。取8例肝癌患者癌結(jié)節(jié)及3例癌旁組織進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量RT
2、-PCR，檢測BMP-7mRNA的表達(dá)?！窘Y(jié)果】BMP-7陽性單位在正常人肝臟（7.27±2.88）、病毒性肝炎（乙型）慢性輕度（8.50±3.22）、中度（10.96±2.88）、重度（13.11±1.26）有逐漸增加趨勢，重型肝炎(7.50±1.21)、肝硬化（8.24±1.79）較中度、重度低；進(jìn)一步比較BMP-7陽性區(qū)灰度有相似結(jié)果（P值均小于0.01）。BMP-7在肝臟既有胞漿型表達(dá)，也有胞膜型表達(dá)。在慢性中度、重度患者及肝硬化結(jié)節(jié)內(nèi)為彌漫性表達(dá)；但在重型肝炎患者，僅呈灶狀表達(dá)；在癌周組織有彌漫或灶狀表達(dá)，在癌結(jié)節(jié)表達(dá)極少?！窘Y(jié)論】在慢性乙型肝炎
3、患者肝組織中BMP-7表達(dá)增多，但是在重型肝炎肝組織及肝癌結(jié)節(jié)中表達(dá)減少，值得進(jìn)一步研究?！娟P(guān)鍵詞】骨形態(tài)發(fā)生蛋白7；肝炎；肝硬化；肝癌乙型肝炎病毒（hepatitisBvirus，HBV）感染可導(dǎo)致慢性肝炎、肝硬化、肝功能衰竭及肝癌。除對癥治療外，抗病毒治療已被越來越多的醫(yī)生及患者接受。然而，無論干擾素還是核苷類似物，療效都不令人滿意，且存在不良反應(yīng)，并有可能在停藥后復(fù)發(fā)甚至發(fā)生肝功能衰竭[1，2]。骨形態(tài)發(fā)生蛋白（bonemorphogeicproteins，BMPs）TGF-β超家族成員中最大的一族，具有廣泛生物學(xué)作用，如影響多種細(xì)胞的增殖、分化和凋
4、亡，參與組織的再生和修復(fù)。BMP-7又稱骨蛋白-1（osteogenicprotein-1,OP-1），主要在骨、腎組織中表達(dá)。研究表明BMP-7具有顯著的抗炎及抗纖維化作用，其作用可能與BMP-7能夠拮抗TGF－β1/Smads信號通路有關(guān)[3-9]。有研究顯示肝臟發(fā)育所必需的同源基因Hex活性必需BMP信號的自分泌和旁分泌[10,11]，BMP-7在肝臟器官發(fā)生發(fā)展中是一種關(guān)鍵的蛋白質(zhì)，有利于肝細(xì)胞的健康[12]。本研究旨在通過對不同慢性HBV感染者肝組織中BMP-7表達(dá)量及表達(dá)模式的研究，發(fā)現(xiàn)BMP-7在在肝臟炎癥損傷、肝細(xì)胞再生、肝癌細(xì)胞異常增生中
5、的表達(dá)規(guī)律，為進(jìn)一步研究其作用機(jī)制及探討其用于慢性肝病治療的前景打下基礎(chǔ)。1材料與方法1.1病例資料56例慢性乙型肝炎病毒感染者，男49例，女7例，標(biāo)本均于中山大學(xué)附屬第三醫(yī)院2002至2006年門診及住院病人，按病理診斷分組，診斷符合2000年全國病毒性肝炎會(huì)議病毒性肝炎防治方案[1]。其中病毒性肝炎乙型慢性輕度12例；中度12例；重度6例；重型8例；乙肝肝硬化10例；肝癌8例。組織標(biāo)本為肝穿刺活檢或肝移植手術(shù)離體后即刻取得。正常對照5例，于中山大學(xué)附屬第三醫(yī)院病理科保存的肝移植供肝組織。所有組織經(jīng)4％多聚甲醛固定后，常規(guī)脫水，石蠟包埋，切5μm切片，5
6、8℃烤片兩小時(shí)備用。取8例肝癌患者的癌組織及3例癌旁組織，TRI-reagent處理后-70℃凍存?zhèn)溆谩?.2試劑及操作1.2.1試劑與儀器BMP-7單克隆抗體、即用型SABC免疫組化染色試劑盒、DAB顯色試劑盒、PBS緩沖液、枸櫞酸鹽緩沖液（博士德生物工程有限公司）；TRI-reagent（Invitrogen生物科技有限公司）；一步法SYBRRT-PCR試劑盒（TaKaRa生物工程公司）。儀器設(shè)備為德國ZEISS（蔡司）Axiotron研究型顯微鏡、日本JVCky-F30B3-CCD彩色圖像攝錄輸入儀、德國KONTRONIBAS2.5全自動(dòng)圖像分析系統(tǒng)
7、、ABIPRISM7000實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀。1.2.2免疫組化步驟基本按試劑盒說明書進(jìn)行。一抗BMP-7抗體用PBS1∶100稀釋后使用。陰性對照以PBS代替BMP-7抗體。二抗1∶4稀釋后使用。1.2.3圖像分析取正常對照5例，輕度8例，中度8例，重度5例，重型7例，肝硬化7例，肝癌3例，進(jìn)行全自動(dòng)圖像分析。每個(gè)病例分析3-4個(gè)視野取平均值。觀察倍數(shù)10×20，圖像面積使用單位μm2。令灰度設(shè)定0級為白，最大灰度級（Gmax）256為黑；測試區(qū)總面積為m+n，灰度為GA；陽性區(qū)面積為n，灰度為Gα；陽性反應(yīng)產(chǎn)物在測試區(qū)的面積密度AAα＝n/（m+n）
8、。陽性單位（positiveunit,PU）按公式：PU=100×
