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1、細胞系的生命期原代培養(yǎng)Primaryculture原代培養(yǎng)Primaryculture概念從體內(nèi)取出組織細胞開始培養(yǎng)到 第一次進行傳代之前的時期 一個特征性的必然的生長階段。完成了從體內(nèi)環(huán)境到體外環(huán)境的過渡和適應(yīng)過程，恢復(fù)了分裂增殖與生長發(fā)育的能力含義:包含)①原代培養(yǎng)實質(zhì)是初次培養(yǎng)，即培養(yǎng)物接種到培養(yǎng)器皿 中就不再分割，任其生長繁殖②原代培養(yǎng)中的“代”并不是指細胞繁殖的“代”數(shù)③原代培養(yǎng)過程中不分割培養(yǎng)物不等于不更換培養(yǎng)液建立方法:組織塊法,分散(細胞懸液）法時間:一般~4周(代：細胞自接種至新培養(yǎng)皿中至其下一
2、次再接種傳代的時間為細胞的一代)特點(1)性質(zhì)①性狀似體內(nèi)可表達某些形態(tài)、結(jié)構(gòu)、功能,更能 代表活體細胞最接近在體時的情況②細胞異質(zhì)性細胞成分混雜，除目的細胞之外， 其它各種細胞還存在③細胞活躍移動，分裂不旺盛④相互依賴性強獨立生存能力差,不易單個培養(yǎng)特點(2)發(fā)展過程:調(diào)整組成原代培養(yǎng)的產(chǎn)生--選擇結(jié)果:形成相對均一的細胞系選擇第一步:形成原代培養(yǎng)的基礎(chǔ)組織塊:能遷移出的消化分散:操作中能生存、附著能懸浮生存特點-發(fā)展過程選擇第二步:時間：數(shù)小時后至鋪滿(匯合confluence)變化：數(shù)小時后至進一步選擇中3
3、種情況:能增殖 能存活 不能存活 細胞類型,繼續(xù)改變,至鋪滿(鋪滿:貼附生長的細胞在培養(yǎng)器皿中生長達到一定數(shù) 量彼此連接成單層長滿器皿底壁)特點-發(fā)展過程選擇第三步:時間：鋪滿(匯合confluence)后(可用于生長區(qū)域已被利用)變化：通過密度抑制密度抑制敏感的細胞(如正常細胞)密度抑制敏感低的細胞(如永生性細胞)特點-發(fā)展過程需及時傳代傳不傳代及何時傳代 根據(jù)： 接種的細胞數(shù)量 培養(yǎng)瓶皿的大小 培養(yǎng)條件在一定程度上具有可人為操作的特征傳代期--細胞系Subculture--Cellline傳代期--細胞系Ce
4、llline概述將原代培養(yǎng)物經(jīng)過分割，重新接種到兩個或兩個以上的器皿內(nèi)進 行培養(yǎng)，進入傳代培養(yǎng)期整個培養(yǎng)過程的主要時期原代培養(yǎng)物----要經(jīng)過反復(fù)傳代 傳代培養(yǎng)期 并不單指原代培養(yǎng)物經(jīng)首次傳代 后的“第一代”培養(yǎng)過程 而是指由首次傳代開始經(jīng)反復(fù)傳代一直到培養(yǎng)物 開始衰退之前的全部時間傳代：細胞生長繁殖一段時間，到達一定細胞密度后，就應(yīng)將細胞分離成二或 幾部份至新的培養(yǎng)器皿并更新補充培養(yǎng)液，使之繼續(xù)繁殖生長，即傳代。經(jīng)過傳代即稱為細胞系細胞系可以繼續(xù)傳代傳代培養(yǎng)期就是維持細胞系增殖、生長的培養(yǎng)過程傳代培養(yǎng)期的長短：
5、培養(yǎng)的細胞種類供體年齡大小一般是有限細胞系特點細胞分裂增殖活動旺盛，細胞生長活躍細胞群體在調(diào)整：每次傳代,調(diào)整-因增殖能力、耐受力差異增殖能力較強的細胞漸處于優(yōu)勢其它逐漸淘汰傳代培養(yǎng)早期，細胞尚能保持二倍體核型隨著傳代次數(shù)增加細胞發(fā)生轉(zhuǎn)化的概率增大能維持的代數(shù)一般是有限細胞系種族(主要):成纖維細胞 人,50;猴,40;雞,37;鼠,8部位:人:胚肺50±10;腎8~19猴:肺5;腎20;耳40條件:如表皮細胞+EGF從50代 增加至150年齡傳代的頻率原則上 貼壁生長將長滿培養(yǎng)罪皿的生長面(器皿的底壁)懸浮培養(yǎng)
6、下細胞密度足夠大 具體時間并沒有定時，根據(jù)具體情況，但提前或過晚(尤以后者)都不合適一般:數(shù)天~一周因素:接種細胞數(shù)量:量大-快接種細胞性質(zhì):細胞系比原代-快培養(yǎng)液:高血清-快意義生物學(xué)意義:形成較均一的細胞實際意義:優(yōu)點:可傳代,有特征,數(shù)目多,均一性,可凍存缺點:遺傳學(xué)可改變,失去分化衰退期Senescencephase衰退期Senescencephase概述仍生存,但基本不增殖-衰退,死亡傳代培養(yǎng)到一定的代數(shù)時，細胞的生命活動明顯減弱。細胞雖然生存，但生長緩慢、 很少分裂增殖甚或不再分裂，即使及時換液也無效
7、表明培養(yǎng)物已經(jīng)進入衰退期，再向前發(fā)展，只有退化、死亡特點:細胞系的生命期--歸宿有限細胞系:一般衰退、死亡轉(zhuǎn)化:永生化:--連續(xù)細胞系自發(fā)性轉(zhuǎn)化誘導(dǎo)轉(zhuǎn)化永生化端粒端粒在真核細胞染色體兩端功能：保護染色體的穩(wěn)定性和完整性以維持DNA完整復(fù)制 生理情況下---細胞分裂---染色體端粒丟失---至一定程度--- DNA復(fù)制不進行---停止分裂∴正常細胞---增殖潛能有限---若干代分裂后---有限細胞系瑞拉酶端粒的長短腫瘤細胞與正常體細胞不同，瑞粒不隨分裂-變短保證此特殊-機制-端粒酶端粒酶可催化、合成并維持瑞粒一定的
8、長度其激活可使細胞-無限增殖能力腫瘤細胞：端粒酶活性高端粒長 無限增殖自發(fā)性轉(zhuǎn)化:偶而,個別通過危機--轉(zhuǎn)化培養(yǎng)的細胞，由于尚不明確的原因---使培養(yǎng)的細胞發(fā)生自發(fā)的轉(zhuǎn)化 轉(zhuǎn)化細胞的性狀可傳遞給予代細胞來源細胞:2種可能轉(zhuǎn)化因素:種族來源正常細胞:人0;雞0;鼠較易9/11誘導(dǎo)轉(zhuǎn)化誘導(dǎo)因素:化學(xué)、幅射、病毒等誘發(fā)培養(yǎng)細胞的轉(zhuǎn)化因素凡能改變DNA(基因)結(jié)構(gòu)的因素都可能成為
