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1、升麻炮制前后有效成分的比較研究周保琪2009級中藥傳承班河南中醫(yī)學(xué)院河南鄭州450008[摘要]目的:建立測定升麻中有效成分阿魏酸和異阿魏酸含量的方法,并比較炮制前后阿魏酸、異阿魏酸和272脫氧升麻亭的含量差異。方法:阿魏酸和異阿魏酸測定方法:色譜柱為YMC2PackODS2C18柱(4.6mm×150mm,5μm),乙腈2水2乙酸(15∶85∶0.25)為流動相,流速0.6mL/min,柱溫26°C,紫外檢測波長320nm;272脫氧升麻亭測定方法:色譜柱為YMC2PackODS2C18柱(4.6mm×150
2、mm,5μm),乙腈2水2乙酸(40∶60∶1)為流動相,流速0.6mL/min,柱溫26°C,示差檢測器。結(jié)果:測定阿魏酸線性范圍(r),加樣回收率為(RSD);異阿魏酸線性范圍(r),加樣回收率為(RSD)。結(jié)論該方法簡便、快捷、準(zhǔn)確,重復(fù)性好,適合于升麻藥材和飲片的質(zhì)量控制。[關(guān)鍵詞]升麻;阿魏酸;異阿魏酸;272脫氧升麻亭;炮制升麻為常用中藥,具有發(fā)表透疹、清熱解毒、升舉陽氣等功能,2010年版《中國藥典》收載其原植物有大三葉升麻CimicifugaheracleifoliaKom.、興安升麻C.dah
3、uricaMaxim.和升麻C.foetidaL.3種。升麻根莖主要含三萜皂苷、有機酸和色原酮類化合物。一般認(rèn)為升麻有機酸是其有效成分,并以所含的阿魏酸、異阿魏酸為指標(biāo)控制質(zhì)量[1～4]。近年來研究發(fā)現(xiàn)升麻所含的環(huán)菠蘿蜜烷型三萜皂苷具有抗腫瘤、抑制核苷運轉(zhuǎn)、調(diào)節(jié)內(nèi)分泌等多種生理活性,也是其活性成分之一。升麻的臨床應(yīng)用以生片和蜜制片為主,有關(guān)升麻炮制研究非常少,本實驗將以RP2HPLC法對升麻炮制前后有效成分阿魏酸、異阿魏酸和三萜皂苷272脫氧升麻亭(272deoxyactein)的含量進(jìn)行測定,并探討升麻炮制前
4、后有效成分變化規(guī)律。1 升麻炮制前后阿魏酸和異阿魏酸的含量測定1.1 儀器與試藥日本Jasco系列HPLC色譜儀:Jascopump21580,JascoUV21575檢測器,Jasco工作站;湘儀天平廠生產(chǎn)TG332A微量分析天平,昆山市超聲儀器有限公司生產(chǎn)KQ2250B型超聲波振動儀。乙腈色譜純(Fisher公司出品),重蒸餾水自制,阿魏酸對照品由中國藥品生物制品檢定所提供(批號077329910),異阿魏酸和272脫氧升麻亭為本課題組分離和結(jié)構(gòu)鑒定,經(jīng)HPLC法檢測含量達(dá)98。1.2 實驗方法1.2.1
5、色譜條件色譜柱為YMC2PackODS2C18柱(4.6mm×150mm,5μm);乙腈2水2乙酸(15∶85∶0.25)為流動相,流速0.6mL/min,柱溫26°C,紫外檢測波長320nm,進(jìn)樣量20μL,外標(biāo)法定量。理論塔板數(shù)按阿酸峰計算,應(yīng)不低于4000。1.2.2 溶液制備對照品溶液制備 準(zhǔn)確稱取干燥至恒重的對照品阿魏酸2.12mg置2mL量瓶中,用80甲醇溶解并稀釋至刻度,搖勻即得1.06mg/mL阿魏酸貯備溶液;另再準(zhǔn)確稱取干燥至恒重的對照品異阿魏酸2.08mg置2mL量瓶中,用80甲醇溶解并稀釋
6、至刻度,搖勻即得1.04mg/mL異阿魏酸貯備溶液。供試品溶液的制備 精密稱取干燥的升麻樣品粉末0.5g,置三角瓶中,加入50mL甲醇,搖勻,于80°C水浴上回流提取40min,過濾,濾渣用20mL甲醇洗滌3次,合并濾液,回收甲醇,提取物用80甲醇定容至2mL量瓶,搖勻,即得。1.2.3 測定法精密吸取阿魏酸和異阿魏酸貯備液80μL和160μL置2mL量瓶,用80甲醇定容至刻度,即為阿魏酸和異阿魏酸稀釋溶液。用微量進(jìn)樣器精密吸取供試品溶液和對照品稀釋溶液各20μL注入HPLC儀,外標(biāo)法定量，得到對照品、樣品HP
7、LC色譜圖,測定結(jié)果見表1。表1 升麻炮制前后有效成分含量測定藥名產(chǎn)地類別阿魏酸含量異阿魏酸含量27脫氧升麻亭含量（㎎／g）(㎎／g）(㎎／g）升甘肅生藥切片蜜制片麻四川開源生藥切片蜜制片興安升麻炮制前后有效成分含量測定藥名產(chǎn)地類別阿魏酸含量異阿魏酸含量27脫氧升麻亭含量（㎎／g）(㎎／g）(㎎／g）興內(nèi)蒙生藥安切片升蜜制片麻牡丹江生藥切片蜜制片河北承德生藥切片蜜制片1.3 方法學(xué)考察1.3.1 穩(wěn)定性試驗取同一供試品溶液按上述色譜條件分別于0,1,2,4,6,10h進(jìn)樣測定,預(yù)測結(jié)果表明含量在10h內(nèi)基本不變
8、。1.3.2 線性關(guān)系考察分別精密吸取阿魏酸貯備溶液20,40,80,120,160μL置1mL量瓶,加80甲醇稀釋至刻度,按上述色譜條件進(jìn)行HPLC分析。以峰面積對進(jìn)樣量進(jìn)行回歸處理,得阿魏酸線性回歸方程,r,線性范圍;另精密吸取異阿魏酸貯備液20,40,60,80,100μL置1mL量瓶,加80甲醇稀釋至刻度,按上述色譜條件進(jìn)行HPLC分析。以峰面積對進(jìn)樣量進(jìn)行回歸處理,得異阿魏酸
