chromatography 色譜 色譜法 色譜分析

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1、Chromatography色譜法第一節(jié)色譜法概述一、色譜法的定義和用途二、色譜法的特點(diǎn)三、色譜法的起源四、色譜法的分類五、色譜法的發(fā)展一、色譜法的定義及用途定義：色譜法(chromatography)，是一種物理或物理化學(xué)的分離分析方法。原理：利用物質(zhì)在固定相和流動(dòng)相中的分配系數(shù)不同，使混合物中的各組分分離。以前學(xué)過的分離方法有：1.沉淀法是利用物質(zhì)溶解度的不同而進(jìn)行分離。2.蒸餾法是利用有機(jī)物沸點(diǎn)的差異進(jìn)行分離。3.萃取法是利用組分在水相和有機(jī)相（互不相溶）中的分配素?cái)?shù)不同進(jìn)行而分離。色譜法的用途用途：色譜法已廣泛用于各個(gè)領(lǐng)域，是多組分混合物首選的

2、分離分析方法。以《中國(guó)藥典》2005版為例，一部收載中藥1146個(gè)品種，用薄層色譜進(jìn)行鑒別或含量測(cè)定的有1523項(xiàng)，用高效液相色譜進(jìn)行定量分析的有479種518項(xiàng)，用氣相色譜進(jìn)行檢測(cè)的有47種。二部收載的有1967個(gè)品種，采用高效液相色譜法的品種有848種?，F(xiàn)在色譜法已形成一門專門的科學(xué)。二、色譜法的起源1．創(chuàng)立：1906年，俄國(guó)植物學(xué)家Tsweet植物色素分離見圖示2．現(xiàn)狀：一種重要的分離、分析技術(shù)分離混合物各組分并加以分析,還可以進(jìn)行制備固定相——除了固體，還可以是液體流動(dòng)相——液體或氣體色譜柱——各種材質(zhì)和尺寸被分離組分——不再僅局限于有色物質(zhì)碳

3、酸鈣（固定相）色素混合液石油醚(流動(dòng)相）1906年，Tsweet發(fā)現(xiàn)色譜分離現(xiàn)象色譜柱色帶植物色素分離圖示三、色譜法的特點(diǎn)優(yōu)點(diǎn)：“三高”、“一快”、“一廣”缺點(diǎn)：高選擇性、高效能、高靈敏度、分析速度快、應(yīng)用范圍廣對(duì)未知物分析的定性專屬性差需要與其他分析方法聯(lián)用(GC-MS,LC-MS)四、色譜法的分類1．按兩相分子的聚集狀態(tài)分類流動(dòng)相固定相類型液相色譜液體固體液-固色譜液體液體液-液色譜氣體固體氣-固色譜氣體液體氣-液色譜氣相色譜超臨界流體色譜法——流動(dòng)相為超臨界流體色譜法分類（續(xù)前）2．按固定相的固定方式分類3．按分離機(jī)制分類平面色譜紙色譜薄層色譜高

4、分子薄膜色譜柱色譜填充柱色譜毛細(xì)管柱色譜分配色譜吸附色譜離子交換色譜空間排阻色譜毛細(xì)管電詠法毛細(xì)管電色譜法毛細(xì)管電泳色譜法分類（圖示）色譜法簡(jiǎn)單分類毛細(xì)管電泳法五、色譜法的發(fā)展1、歷史30年代茨維特分離綠葉色素，產(chǎn)生固液吸附色譜40年代液—液分配色譜法、TLC、紙色譜50年代GC出現(xiàn)使色譜具備分離和在線分析功能60年代推出了色譜－質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)（GC-MS）70年代HPLC出現(xiàn)使色譜分析范圍進(jìn)一步擴(kuò)大80年代出現(xiàn)了超臨界流體色譜法、毛細(xì)管電泳法90年代崛起的電色譜法，兼有毛細(xì)管電泳法與微微填充柱色譜法的優(yōu)點(diǎn)21世紀(jì)色譜科學(xué)將在生命科學(xué)等的前沿發(fā)揮他不可替

5、代的重要作用2、展望⑴新型固定相和檢測(cè)器手性固定相、浸透限制性固定相、灌注色譜固定相、生物色譜固定相等；蒸發(fā)光散射檢測(cè)器⑵色譜新方法的研究超臨界流體色譜法、毛細(xì)管電詠法、毛細(xì)管電色譜法⑶色譜聯(lián)用技術(shù)GC-MS、LC-MS、GC-FTIR⑷色譜專家系統(tǒng)是一種色譜－計(jì)算機(jī)聯(lián)用技術(shù)第二節(jié)色譜過程和基本原理一、色譜過程、分離原理及特點(diǎn)二、色譜流出曲線和有關(guān)概念三、分配系數(shù)與色譜分離一、色譜過程、分離原理及特點(diǎn)㈠色譜過程指被分離組分在兩相中的“分配”平衡過程以吸附色譜為例見圖示吸附→解吸→再吸附→再解吸→反復(fù)多次洗脫→被測(cè)組分分配系數(shù)不同→差速遷移→分離圖示分配

6、系數(shù)的微小差異→吸附能力的微小差異微小差異積累→較大差異→吸附能力弱的組分先流出；吸附能力強(qiáng)的組分后流出back續(xù)前㈡色譜分離原理色譜分離基于各組分在兩相之間平衡分配的差異平衡分配可以用分配系數(shù)和分配比來衡量㈢色譜分離特點(diǎn)1．不同組分通過色譜柱時(shí)的遷移速度不等→提供了分離的可能性2．各組分沿柱子擴(kuò)散分布→峰寬→不利于不同組分分離二、色譜流出曲線和有關(guān)概念㈠色譜流出曲線和色譜峰流出曲線(色譜圖)：電信號(hào)強(qiáng)度隨時(shí)間變化曲線基線：無樣品時(shí)的電信號(hào)，反映儀器噪音的情況色譜峰：流出曲線上突起部分圖17－2續(xù)前對(duì)稱因子正常峰（對(duì)稱）非正常峰前沿峰拖尾峰色譜峰——f

7、s=0.95~1.05——fs<0.95——fs>1.05（二）保留值：色譜定性參數(shù)1.保留時(shí)間（tR)：從進(jìn)樣開始到組分出現(xiàn)濃度極大點(diǎn)時(shí)所需時(shí)間，即組分通過色譜柱所需要的時(shí)間2.死時(shí)間（t0）：不被固定相溶解或吸附的組分的保留時(shí)間。即，分配系數(shù)為零的組分。3.調(diào)整保留時(shí)間（tR’）：組分的保留時(shí)間與死時(shí)間之差值，即組分在固定相中滯留的時(shí)間圖片4.保留體積（VR）：從進(jìn)樣開始到組分出現(xiàn)濃度極大點(diǎn)時(shí)所消耗的流動(dòng)相的體積5.死體積(V0)：由進(jìn)樣器至檢測(cè)器的流路中未被固定相占有的空間。6.調(diào)整保留體積VR'：保留體積與死體積之差，即組分停留在固定相時(shí)所消耗

8、流動(dòng)相的體積7.相對(duì)保留值ri,s(選擇性系數(shù)?)：調(diào)整保留值之比8.保留指數(shù)Ix指將待測(cè)物的