小鼠骨鈣素(oc)elsia試劑盒說明

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1、上海酶聯(lián)生物WWW.MLBIO.CN021-61725725THG小鼠骨鈣素(OC)elsia試劑盒說明骨鈣素(OC)對糖代謝的影響及其活性調(diào)節(jié)。小鼠骨鈣素(OC)elsia試劑盒用于測定小鼠血清、血漿及相關(guān)液體樣本中骨鈣素(OC)含量。小鼠骨鈣素(OC)elisa試劑盒規(guī)格：48/96T；產(chǎn)品別名：小鼠骨鈣素(OC)檢測試劑盒，小鼠骨鈣素(OC)酶聯(lián)免疫試劑盒，小鼠骨鈣素(OC)ELISA試劑盒；英文名稱：OCELISAKit；檢測范圍：3μg/L-120μg/L。試劑盒組成130倍濃縮洗滌液20ml×1瓶7終止液6ml×1瓶2酶標(biāo)試劑6ml×

2、1瓶8標(biāo)準(zhǔn)品（240μg/L）0.5ml×1瓶3酶標(biāo)包被板12孔×8條9標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液1.5ml×1瓶4樣品稀釋液6ml×1瓶10說明書1份5顯色劑A液6ml×1瓶11封板膜2張6顯色劑B液6ml×1/瓶12密封袋1個(gè)小鼠骨鈣素(OC)elsia試劑盒保存條件及有效期1．試劑盒保存：；2-8℃。2．有效期：6個(gè)月小鼠骨鈣素(OC)elsia實(shí)驗(yàn)小鼠骨鈣素(OC)elsia試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中小鼠骨鈣素(OC)水平。用純化的小鼠骨鈣素(OC)抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入骨鈣素(OC)，再與HRP標(biāo)記的骨鈣素(O

3、C)抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的骨鈣素(OC)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中小鼠骨鈣素(OC)濃度。小鼠骨鈣素(OC)elsia實(shí)驗(yàn)標(biāo)本要求1．標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融2．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。elsia實(shí)驗(yàn)操作步

4、驟1.標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。120μg/L5號標(biāo)準(zhǔn)品150μl的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液60μg/L4號標(biāo)準(zhǔn)品150μl的5號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液30μg/L3號標(biāo)準(zhǔn)品150μl的4號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液15μg/L2號標(biāo)準(zhǔn)品150μl的3號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液7.5μg/L1號標(biāo)準(zhǔn)品150μl的2號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液2.加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)

5、品準(zhǔn)確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品最終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。3.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。4.配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。6.加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外。上海酶聯(lián)生物WWW.MLBIO.CN021-61725725THG1.溫育：操作同3。2.洗滌：操作同5。3.顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再

6、加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.4.終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。5.測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。小鼠骨鈣素(OC)elsia計(jì)算以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計(jì)算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實(shí)際濃度。elsia實(shí)驗(yàn)操作程序總結(jié)：小鼠骨鈣

7、素(OC)elsia注意事項(xiàng)1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。2．濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶，洗滌時(shí)不影響結(jié)果。3．各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性，以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間最好控制在5分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。4．請每次測定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線，最好做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高（樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔第一孔的OD值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）上海酶聯(lián)生物WWW.MLBIO.CN021-61725725T

8、HG后再測定，計(jì)算時(shí)請最后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）。4．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。6．底物請避光保存。7．嚴(yán)格按照說明書的