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1、HMGA2在胃癌組織中的表達(dá)及意義陳家莊1賴銘裕2（通訊作者）韋麗秀1梁志海2（1南寧市廣丙醫(yī)科大學(xué)530021）（2廣丙醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院消化內(nèi)科530021）【摘要】目的：探討高遷移率蛋白HMGA2在胃癌組織、癌旁組織、正常胃黏膜組織中的表達(dá)及其意義。方法：采用RT-PCR及SP免疫組化法檢測(cè)50例胃癌組織及對(duì)應(yīng)的癌旁組織、正常胃黏膜組織中的HMGA2的表達(dá)，與臨床資料做統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。結(jié)果：在胃癌組織中HMGA2mRNA有68.0%（34/50）呈高表達(dá)，HMGA2在胃癌組織和癌旁組織、正常胃黏膜組織中的表達(dá)存在顯著性差異（P<0
2、.01）,HMGA2的表達(dá)與和胃癌患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及臨床分期有相關(guān)性（均P<0.05）。結(jié)論：HMGA2在胃癌中呈過度表達(dá)，可能成為胃癌診斷及良惡性鑒別診斷指標(biāo)之一?！娟P(guān)鍵詞】高遷移率蛋白A2胃癌逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)免疫組化【中圖分類號(hào)】R730.23【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A【文章編號(hào)】2095-1752（2012）07-0057-03胃癌是人類常見的惡性腫瘤，居全球腫瘤發(fā)病和癌癥死亡率的第二位［1］。盡管近年來對(duì)胃癌的研究取得了進(jìn)展，但大多數(shù)患者有臨床癥狀時(shí)都己處于晚期并出現(xiàn)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。HMGA2是近年來研宄的熱點(diǎn)癌基因之一，其屬于高遷移率蛋白
3、A家族中的一員，含有3個(gè)AT-鉤結(jié)構(gòu)與和1個(gè)酸性C末端。HMGA2蛋白是一種非組蛋白染色體蛋白，木身缺乏轉(zhuǎn)錄活性，但能通過與染色質(zhì)結(jié)合而改變其結(jié)構(gòu)，或者直接與相關(guān)蛋白結(jié)合發(fā)生作用，繼而調(diào)節(jié)其他基因的轉(zhuǎn)錄［2］。研究表明HMGA2蛋白的表達(dá)參與人類多種腫瘤的發(fā)牛.，如肺癌、卵巢癌、大腸癌、胰腺癌、脂肪瘤等。木實(shí)驗(yàn)通過采用RT-PCR及SP免疫組化法檢測(cè)50例胃癌組織及對(duì)應(yīng)的癌旁組織、正常胃黏膜組織中的HMGA2的表達(dá)，同時(shí)分析患者的發(fā)病年齡、腫瘤大小，臨床分期，淋巴轉(zhuǎn)移等情況，進(jìn)而探討HMGA2與胃痛的關(guān)系。1材料與方法1.1材料選取廣西醫(yī)科
4、大學(xué)第一附屬醫(yī)院2009年9月至2010年9月接受胃大部切除術(shù)的胃癌標(biāo)本50例，均經(jīng)組織病理學(xué)檢查證實(shí)，所冇標(biāo)本術(shù)前均未接受非逛體抗炎藥治療及放化療。男38例，女12例，年齡28?71歲，中位年齡52.7歲。其中高分化、中分化癌17例，低分化、未分化癌33例，未侵及漿膜者19例，侵及漿膜者31例，發(fā)生局部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者26例，無局部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者24例，TNM分期：1、II期共28例，III、IV期共22例。冋吋取距癌緣5cm的癌旁組織50例，正常胃黏膜組織50例作為對(duì)照組。TrizoI試劑盒，逆轉(zhuǎn)錄試劑盒均購自上海生物工程科技公司；2&tim
5、es;TaqPCRMasterMix購自北京天根生化科技有限公司；試劑采用兔抗人HMGA2多克隆抗體，購自北京博奧森生物技術(shù)有限公司，SP試劑盒，DAB顯色試劑盒均購自福州邁新生物科技公司。1.2方法1.2.1PT-PCR法將胃癌組織、癌旁組織及正常胃粘膜組織約100mg用Trizol法提取總RNA,用紫外分光光度計(jì)在260和280nm處測(cè)吸光OD值，計(jì)算RNA含量和純度。按cDNA逆轉(zhuǎn)錄酶試劑盒說明書進(jìn)行操作，取3μgRNA逆轉(zhuǎn)錄為cDNA,以cDNA為模板進(jìn)行PCR擴(kuò)增,PCR引物由上海生物工程科技公司合成。HMGA2上游引物序：
6、5-CGAAAGGTGCTGGGCAGCTCCGG-3；下游引物序列:5-CCATTTCCTAGGTCTGCCTCTTG-3,產(chǎn)物長(zhǎng)度為323bp。內(nèi)參GAPDH上游引物序列：5-GAAGGTGAAGGTCGGAGTC-3,下游引物序列：5-GAAGGTGAAGGTCGGAGTC-3,產(chǎn)物長(zhǎng)度401bp。反應(yīng)條件：第一步，95°C預(yù)變性5min；第二步，94°C變性40s、58°C退火40s、72°C延伸40s,共30個(gè)循環(huán)；第三步，72°C延伸10min。反應(yīng)體系共25μL。取PCR擴(kuò)增產(chǎn)物行2%瓊脂糖凝膠電泳（含核酸染料），用凝膠
7、分析儀照相分析。以（S的條帶的灰度值-背景灰度值）/（內(nèi)參灰度值-背景灰度值）的值表示HMGA2mRNA的相對(duì)表達(dá)量。1.2.2免疫組織化學(xué)法所奮標(biāo)本均經(jīng)10%甲醛固定常規(guī)脫水、透明、滲蠟、包埋4μm厚連續(xù)切片，常規(guī)脫蠟、水化，采用免疫組織化染色超敏兩步法(SP染色),DAB顯色，蘇木素復(fù)染，吹干，具體操作按SP試劑盒說明書進(jìn)行，陰性對(duì)照采用生理鹽水磷酸鹽緩沖液PBS代替一抗。HMGA2以胞漿或胞核出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性表達(dá)。應(yīng)用全自動(dòng)圖像分析儀，Image-ProPlus6.0圖像分析軟件檢測(cè)陽性細(xì)胞的平均灰度值，灰度值越高，表達(dá)強(qiáng)度
8、越弱。1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理運(yùn)用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件SPSS13.0進(jìn)行數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)學(xué)分析計(jì)量資料采用x-±s來表示，組間比較采用SNK法檢驗(yàn)，P<0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。2結(jié)
