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1、螺旋藻多糖對(duì)免疫低下小鼠淋巴細(xì)胞增殖及促進(jìn)IFN【關(guān)鍵詞】螺旋藻多糖免疫低下淋巴細(xì)胞增殖γ-干擾素 Abstract:ObjectiveToobservetheeffectofSpirulinaplatensispolysaccharideonlymphocyteproliferationandIFN-γinductioninimmunosuppressivemodelmicecausedbycyclophosphamide.MethodsHealthymaleKunmingmicemunosup
2、pressivemodelbytheperitonealinjectionofCyclophosphamide.MTTcolorimetryinethecellproliferationofspleencellandthymuscell.IFN-γconcentrationofculturalsupernatantfromspleencellinedbyenzymelinkedimmunosorbentassay.Resultsparedodelgroup,thelymphocyteprolifer
3、ationandIFN-γproductionSpirulinaplatensishasimmuneregulativeeffectbypromotingthecellproliferationandIFN-γinduction. KeySpirulinaplatensis;immunosuppression;Lymphocyteproliferation;IFN-γ 螺旋藻多糖(polysaccharidefromSpirulinaplatensis,PSP)是從螺旋藻中提取的一種酸性、水溶性
4、的雜多糖，除了具有豐富的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值外，還具有多種生物活性和免疫調(diào)節(jié)功能，如：抗腫瘤、抗病毒、抗氧化、抗輻射等作用，已成為國(guó)內(nèi)外藥物研究開(kāi)發(fā)的熱點(diǎn)之一。本實(shí)驗(yàn)觀察了PSP對(duì)免疫低下小鼠淋巴細(xì)胞的增殖情況及其對(duì)IFN-γ的誘生作用，為闡明PSP的免疫調(diào)節(jié)作用機(jī)制提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)?！ ?器材與方法 1.1材料 1.1.1螺旋藻多糖的提取 采用改良的三氯乙酸去蛋白法從螺旋藻中提取出的粗多糖，硫酸蒽酮法測(cè)定糖含量為90%以上?！ ?.1.2動(dòng)物 昆明種小鼠（KM小鼠），雄性，6～8周齡，體重18～22g，由
5、廣東醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供?！ ?.2試劑與儀器 RPMI-1640培養(yǎng)基（美國(guó)GIBCO產(chǎn)品）；新生牛血清（杭州四季青生物工程研究所）；ConA（Sigma公司）；四甲基偶氮唑鹽（MTT,Sigma公司）；ELISA試劑盒（武漢博士德生物公司），其余試劑為國(guó)產(chǎn)分析純。酶標(biāo)儀：ELx8009（BIO-TEK公司）?！ ?.3動(dòng)物模型分組、制備及給藥方法取健康昆明小鼠50只，隨機(jī)分為5組：正常對(duì)照組(A組)、模型對(duì)照組(B組)和3組不同濃度螺旋藻多糖模型組(C，D，E組)，每組10只。A組每只小鼠腹
6、腔注射生理鹽水1ml/d，連續(xù)10d；B，C，D和E組每只小鼠先腹腔注射環(huán)磷酰胺2mg/d，連續(xù)3d，第4天開(kāi)始分別注射生理鹽水和不同濃度的螺旋藻多糖，連續(xù)7d；觀察免疫低下模型組小鼠與正常對(duì)照組小鼠比較，活動(dòng)度降低、毛皮顏色較暗、無(wú)光澤等，表明造模成功?！ ?.4檢測(cè)指標(biāo) 1.4.1小鼠脾細(xì)胞和胸腺細(xì)胞懸液的制備無(wú)菌條件下拉頸處死小鼠，取出脾臟和胸腺，去脂肪和結(jié)締組織，分別放入盛有適量RPMI-1640培養(yǎng)液的培養(yǎng)皿內(nèi)，剪碎置于培養(yǎng)皿中，用毛玻璃輕輕研磨，使細(xì)胞懸于RPMI-1640培養(yǎng)液中，然
7、后用8層無(wú)菌紗布濾出單細(xì)胞懸液，然后用RPMI-1640培養(yǎng)液洗兩次，將洗過(guò)的細(xì)胞懸液懸浮于含10%新生小牛血清的RPMI-1640完全培養(yǎng)液中，用0.4%臺(tái)盼藍(lán)染料計(jì)數(shù)細(xì)胞的活細(xì)胞率為95%以上。 1.4.2小鼠脾細(xì)胞和胸腺細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)將細(xì)胞懸液接種于96孔培養(yǎng)板，脾細(xì)胞2×105/孔、胸腺細(xì)胞4×106/孔，然后每孔加入5μg/mlConA50μl，六復(fù)孔培養(yǎng)，于37℃，5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)68h后，加入5μg/mlMTT10μl/孔，繼續(xù)培養(yǎng)4h，再加入三聯(lián)液100μl/孔，混勻，放置過(guò)夜
8、，次日用酶標(biāo)儀檢測(cè)各孔的吸光度OD570nm值?！ ?.4.3對(duì)脾細(xì)胞產(chǎn)生IFN-γ的影響將脾細(xì)胞懸液接種于24孔培養(yǎng)板，5×105/孔，在37℃，5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48h，收集上清，凍存于-20℃。根據(jù)ELISA試劑盒方法說(shuō)明操作，測(cè)定IFN-γ的含量。 表1結(jié)果表明，與正常對(duì)照組相比，模型組小鼠的脾細(xì)胞增殖OD值顯著降低（P<0.01），胸腺細(xì)胞增殖OD值顯著降低（P<0.01），說(shuō)明制備免疫低下模型成功。高、中、低劑量螺旋藻多糖可顯著促進(jìn)免疫低
