資源描述：
《豬仔大腸桿菌分離鑒定及藥敏試驗》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫。
1、仔豬大腸桿菌的分離鑒定及藥敏試驗廖娟任小春唐萌伍超王鋼*（樂山師范學院化學與生命科學學院，四川樂山）豬仔大腸桿菌病俗稱白痢、黃痢，是由致病性大腸桿菌引起的急性腸道傳染病。該疾病是常見且危害性極大的傳染病之一。目前，各養(yǎng)豬場防治豬仔大腸桿菌病常用的方法仍然是用抗生素類的藥物，但由于豬仔服用大量的抗菌藥物，易造成細菌耐藥性的的產(chǎn)生，因此需對分離出的細菌進行藥敏性試驗，進而為臨床用藥提供理論依據(jù)。針對樂山某種豬場提供的腹瀉嚴重的仔豬白痢病料，我們進行了細菌分離鑒定和藥敏試驗，以期為仔豬大腸桿菌病的有效防治提供一些技術參考資料。
2、1.材料與方法1.1材料1.1.1病料的采集從樂山某養(yǎng)豬場采集患白痢的豬仔肛門拭子病料12份。1.1.2主要試劑培養(yǎng)基及細菌鑒定用的生化試劑等由樂山師范學院化學與生命科學學院實驗室提供。1.1.3供試藥片頭孢氨噻肟、氟苯尼考、左氟沙星、慶大霉素等含藥紙片，購自杭州微生物試劑責任有限公司。1.1.4試驗動物清潔級昆明系小白鼠雌雄各半，共10只，購自樂山長征制藥廠。1.2試驗方法1.2.1病原菌的分離培養(yǎng)從樂山裕龍養(yǎng)豬場采集患有白痢豬仔的肛門拭子病料，將其浸入到滅菌生理鹽水中，充分洗脫，將其懸浮液分別劃線接種于麥康凱瓊脂培養(yǎng)
3、基上，37℃培養(yǎng)24h,然后挑取麥康凱瓊脂培養(yǎng)基上的粉紅色、表面光滑的單個菌落接種到營養(yǎng)瓊脂斜面上，37℃培養(yǎng)24h后，置冰箱保存?zhèn)溆谩?.2.2菌體形態(tài)觀察將上述培養(yǎng)基上所得的菌落進行涂片，革蘭氏染色，鏡檢，觀察細菌形態(tài)以及染色特征，將符合大腸桿菌形態(tài)特征的進行生化試驗，否則棄之。1.2.3生化試驗將上述分離出的純培養(yǎng)物進行糖發(fā)酵試驗、吲哚試驗、MR試驗、VP試驗、枸櫞酸鹽試驗，觀察其變化并記錄結果。1.2.4致病性試驗將符合生化反應符合大腸桿菌特性的菌株接種營養(yǎng)瓊脂平板，37℃培養(yǎng)18h后，用生理鹽水洗下菌落制成菌懸
4、液。將小白鼠隨機分為兩組，其中一組每只皮下注射0.2ml菌懸液,另一組注射相同劑量的無菌生理鹽水。將24-48h左右死亡的小鼠立即解剖，并且用接種環(huán)取其心血接種于營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基上，并對分離出的菌株進行進一步鑒定。1.2.5藥敏性試驗將稀釋好的菌液每個平板接種0.1ml，使菌液鋪滿整個平板，待平板干后，用無菌鑷子取各種藥片貼于平板上，每個平板5張藥片，每個藥片之間的距離不小于3cm,將貼好藥片的平板置于37℃的恒溫箱中培養(yǎng)24h后觀察實驗結果并測出個藥片的抑菌圈直徑，并按照標準判定敏感，中度敏感和耐藥情況。2.結果2.1分
5、離培養(yǎng)特性在麥康凱瓊脂培養(yǎng)基上均呈粉紅色、光滑濕潤、邊緣整齊的菌落；在普通瓊脂培養(yǎng)基上呈灰白色、圓形、整齊、隆起、光滑濕潤的菌落，與大腸桿菌的形態(tài)特征相符。*通訊作者：王鋼（1979—），講師，主要從事預防獸醫(yī)學研究。Email：lswanggang@163.com2.2染色鏡檢分離菌株革蘭氏染色為陰性小桿菌，兩端鈍圓，多單個存在，與大腸桿菌染色特性相符。2.3生化鑒定分離出的菌株均能發(fā)酵葡萄糖、乳糖、麥芽糖、甘露醇，均能產(chǎn)酸產(chǎn)氣，大多數(shù)菌株不利用蔗糖，少數(shù)緩慢發(fā)酵，ＶＰ實驗、枸櫞酸鹽試驗均為陰性，吲哚試驗、MR試驗均為
6、陽性，以上試驗結果可證明分離出的菌株為大腸桿菌。2.4致病性試驗試驗組的小白鼠在接種后出現(xiàn)精神萎靡，進而出現(xiàn)拉稀等臨床癥狀，接種10h后開始死亡，24h內(nèi)全部死亡，解剖死小白鼠，均能見其內(nèi)臟充滿淤血，肝臟腫大，并且在心血和肝臟中能分離出大腸桿菌，而對照組的小白鼠無明顯變化，由此可見，從豬仔肛門處分離出的大腸桿菌具有較強的致病性。2.5藥敏性試驗對分離出的菌株進行藥敏性試驗，其結果如表1所示。表1分離菌株的藥物敏感性試驗結果抑菌藥物判斷標準抑菌圈直徑(mm)判定結果耐藥中敏敏感氟苯尼考≤1213-17≥185耐藥丁胺卡那≤
7、1314-16≥1818敏感阿莫西林≤1314-16≥175耐藥慶大霉素≤1213-14≥1510耐藥阿奇霉素≤1213-16≥1528敏感恩諾沙星≤1516-20≥2120中敏新霉素≤1213-14≥1514中敏先鋒Ⅵ≤1415-17≥1810耐藥頭孢噻肟≤1415-22≥235耐藥環(huán)丙沙星≤1314-15≥1614中敏復方新諾明≤1213-16≥175耐藥先鋒Ⅴ≤1213-15≥1610耐藥磺胺異惡唑≤1213-16≥175耐藥氨芐青霉素≤1213-15≥165耐藥羅紅霉素≤1213-16≥209耐藥痢特靈≤1213
8、-15≥1618敏感福利平≤1617-19≥2012耐藥培氟沙星≤1213-15≥1620敏感淋必治≤1414-16≥1714中敏卡那霉素≤1314-17≥1818敏感氯霉素≤1213-17≥1812耐藥強力霉素≤1213-26≥185耐藥上述結果表明，分離菌對氟苯尼考、阿莫西林、慶大霉素、先鋒Ⅵ、頭孢噻肟、復方新諾
