溫度對酶活性影響

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1、課題2溫度對酶活性的影響課題概述：生物體內(nèi)的各項代謝，只有在酶的參與下才能迅速進行。酶的本質(zhì)是蛋白質(zhì)，其催化作用受溫度等條件的影響。不同類酶均有其作用的最適溫度，高于或低于該溫度，酶的活性就會下降，直至完全遭到破壞。過氧化氫酶雙氧水對大多數(shù)生物體有害，而許多生物體內(nèi)都有過氧化氫酶等來分解它。H2O2—————→H2O+O2本實驗將以酵母菌為過氧化氫酶來源，利用氧氣濃度傳感器來測定不同溫度下該反應的速度，從而確定過氧化氫酶發(fā)揮作用的最適溫度。氧氣濃度傳感器可測定氣體中0-27%范圍的氧氣的濃度。其核心裝置是一原電池，氧氣分子進入其中被還原而引起電流變化，即氧氣濃度決定了電流

2、變化的大小，進而改變輸出電壓的大小。因此通過對輸出電壓的測定即可確定氣體中氧氣的濃度。目的：1．學會氧氣濃度傳感器的使用方法。2．學會測定不同溫度下酶促反應的速率，并對各速率進行比較。器材：實驗材料：市售干酵母。實驗儀器及用品：TI—83Plus圖形計算器及CBL系統(tǒng)、氧氣濃度傳感器(附配套塑料瓶)、玻璃棒、溫度計、100mL小燒杯、50mL量筒、小試管、刻度移液管、膠頭滴管、保溫杯、蒸餾水洗瓶、冰、冷水、熱水、吸水紙。實驗試劑：3%H2O2溶液、2%葡萄糖。步驟：一．實驗準備1．水浴準備：保溫杯(或兩個燒杯間填充泡沫塑料代替之)中盛放一定量冰水或熱水，分別調(diào)至0—5℃、

3、20—25℃、30—35℃、35—40℃。實驗期間溫度計始終要懸在水中，監(jiān)測溫度。如有變化，及時調(diào)整。　　2．稱取0.5g干酵母溶解在25mL2%葡萄糖溶液中，攪拌均勻。取4支小試管，各加入1mL上述懸濁液，分別置于各溫度水浴中5—10分鐘。二．設置傳感器1．連接TI—83Plus圖形計算器、CBL系統(tǒng)。2．將氧氣濃度傳感器與CBL系統(tǒng)CH1通道相連。3．打開TI—83Plus圖形計算器、CBL系統(tǒng)，按APPS，選擇“CHEMBIO”程序，按ENTER。(見圖1、2)圖1圖24．在“MAINMENU”菜單中選擇“1：SETUPPROBES”；輸入傳感器數(shù)量“1”，按ENT

4、ER。(見圖3)5．在“SELECTPROBE”菜單中選擇選擇“7：MOREPROBES”，直至出現(xiàn)氧氣濃度傳感器。6．在“SELECTPROBE”菜單中選擇“4：OXYGENSENSOR”。(見圖4)圖3圖47．輸入通道序號“1”；在“CALIBRATION”菜單中選擇“1：USESTORE”。(見圖5、6)圖5圖68．在“OXYGENUNITS”菜單中選擇“1：PERCENT”。傳感器設置完成后即返回“MAINMENU”菜單。(見圖7、8)圖7圖8三．設置采樣方式1．在“MAINMENU”菜單中選擇“2：COLLECTDATA”。(見圖9)2．在“COLLECTDAT

5、A”菜單中選擇“2：TIMEGRAPH”，預熱30秒后，按ENTER。(見圖10)圖9圖103．輸入采樣間隔時間：“30”秒，按ENTER。輸入采集數(shù)據(jù)點的點數(shù)：“16”個，按ENTER。屏幕顯示該次采樣共需歷時480秒，按ENTER。(見圖11、12)圖11圖124．在“CONTINUE”菜單中選擇“1：USETIMESETUP”。(見圖13)圖135．輸入Y軸(氧氣百分含量)的最小值：“19.0”(%)，按ENTER。輸入Y軸的最大值：“22.0”(%)，按ENTER。輸入Y軸坐標點間隔：“0.5”，按ENTER。隨后出現(xiàn)的屏幕上告知“按ENTER開始收集數(shù)據(jù)”。(見

6、圖14、15)圖14圖15四．數(shù)據(jù)采集1．用移液管移取3mL3%H2O2溶液于氧氣濃度傳感器附帶之塑料瓶中，再加入3mL蒸餾水后，放入35-40℃水浴中溫育5分鐘左右。2．用滴管滴加4滴35-40℃溫度的干酵母葡萄糖溶液，略微震蕩搖勻后塞上氧氣濃度傳感器，按ENTER開始收集數(shù)據(jù)。3．當CBL顯示“DONE”時，采樣全部完成(見圖16)。按ENTER即可看到氧氣濃度隨時間變化曲線，按ENTER。4．在“REPEAT”菜單中選擇“1：NO”。(見圖17)圖16圖175．在“MAINMENU”菜單中選擇“7：QUIT”。6．取出傳感器，洗凈塑料瓶，吸干水分。用風扇或紙扇對傳感

7、器扇風一分鐘左右以換氣。五．數(shù)據(jù)存儲1．在主界面中按2nd+[LIST]，在“NAMES”菜單中選擇“1：L1”；按STOT；按ALPHA+[A]，按ENTER。此操作將L1數(shù)組中的數(shù)據(jù)存儲到A數(shù)組中。(見圖18、19)圖18圖192．在主界面中按2nd+[LIST]，在“NAMES”菜單中選擇“2：L2”；按STOT；按ALPHA+[B]，按ENTER。此操作將L2數(shù)組中的數(shù)據(jù)存儲到B數(shù)組中。(見圖20、21)圖20圖21六．繼續(xù)數(shù)據(jù)采集。1．按APPS，選擇“CHEMBIO”程序，按ENTER。2．重復三、四、五的操作步驟