microrna-630在胃癌中的表達(dá)及意義

《microrna-630在胃癌中的表達(dá)及意義》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。

1、microRNA-630在胃癌中的表達(dá)及意義(1東南大學(xué)醫(yī)學(xué)院江蘇南京210009;江蘇省丹陽市人民醫(yī)院消化內(nèi)科江蘇鎮(zhèn)江212300)(2東南大學(xué)附屬中大醫(yī)院消化內(nèi)科江蘇南京210009)【摘要】目的：探討miR-630在胃癌細(xì)胞組織中的表達(dá)形式，及其與臨床病理特征的關(guān)聯(lián)性。方法：選用莖環(huán)實(shí)時(shí)RT-PCR方法檢測(cè)40例胃癌組織細(xì)胞及癌旁組織中miR-630的表達(dá)，并分析miR-630的表達(dá)及其與胃癌組織臨床病理特征的關(guān)聯(lián)性。結(jié)果：選用莖環(huán)實(shí)時(shí)RT-PCR方法檢測(cè)miR-630表達(dá)的敏感性較強(qiáng)和特異性表現(xiàn)良好

2、。miR-630在胃癌細(xì)胞組織中的表達(dá)(0.85±0.24)明顯小于正常胃組織(1.63±1.02),統(tǒng)計(jì)學(xué)差異很明顯(P<0.05)。miR-630在發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的胃癌細(xì)胞組織體中的表達(dá)(0.65±0.13)低于未發(fā)牛.轉(zhuǎn)移的胃組織中的(0.94±0.48,P<0.05)；在已經(jīng)高度分化胃癌組織中的表達(dá)小于分化較小腫瘤組織中的，其統(tǒng)計(jì)學(xué)差異明顯(P<0.05hmiR-630的表達(dá)與性別、年齡、TNM分期無顯著關(guān)系(P>0.0

3、5)。結(jié)論：miR-630在胃癌組織中的表達(dá)高于正常組織，與胃癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和臨床分期有一定關(guān)聯(lián)。miR-630在胃癌的發(fā)展過程中可能發(fā)揮重要作用，可能是胃癌治療的新靶標(biāo)?！娟P(guān)鍵詞】微RNAs;胃腫瘤;月中瘤轉(zhuǎn)移;miR-630【中圖分類號(hào)】R730.2【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A【文章編號(hào)】2095-1752(2015)35-0122-02胃癌是最常見的惡性腫瘤之一，其發(fā)病率居消化道惡性腫瘤之首，其早期診斷較為困難，發(fā)現(xiàn)時(shí)常處于進(jìn)展期，預(yù)后較差。據(jù)統(tǒng)計(jì)，我國每年因胃癌死亡人數(shù)達(dá)26萬［1］。胃癌的發(fā)生和發(fā)展是一個(gè)多步驟

4、參與的多種相關(guān)基因失活的結(jié)果，其發(fā)生機(jī)制尚未完全闡明，早期診斷尤為困難。微RNA(MicroRNA/miRNA)是含有19?22個(gè)核苷酸的內(nèi)源性非編硏單鏈小分子RNA。大量研究表明，miRNA參與了細(xì)胞的發(fā)育、分化、增殖、凋亡、遷移及侵襲等生物學(xué)過程，并在腫瘤發(fā)生及淋巴轉(zhuǎn)移中起重要作用[2-4],其參與腫瘤調(diào)控的相關(guān)研究也是近年熱點(diǎn)。miRNA有利于胃癌組織的分化，在其分化過程中起了重要作用。本文測(cè)量此物質(zhì)在胃癌組織中的含量與表達(dá)時(shí)選用了熒光定量反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-qPCR)技術(shù)，并用分析其與胃癌臨床

5、病理特征的關(guān)系，所得結(jié)果如下。1.資料與方法1.1一般資料收集江蘇省丹陽市人民醫(yī)院2014年1-10月行手術(shù)治療并經(jīng)病理確診的40份胃癌組織標(biāo)本(胃癌組)和距離癌組織邊緣>5cm的癌旁正常胃組織標(biāo)本(癌旁組)。術(shù)前未行放、化療。組織病理類型的判斷標(biāo)準(zhǔn)參照WHO胃癌的病理分類?；颊吣挲g42?78歲，中位年齡65歲。1.2實(shí)驗(yàn)方法1.2.1標(biāo)本所奮標(biāo)本均于術(shù)后15min內(nèi)獲得，經(jīng)液氮速凍后-80°C冰箱保存。1.2.2總RNA提取總RNA用Trizol試劑(Invitrogen)提?。籘RIzol試劑提取

6、RNA:(1)細(xì)胞或組織加Trizol后，室溫放置5min,使其充分裂解。(2)12?000rpm離心5min,棄沉淀。(3)按200ul氯仿/mlTrizol加入氯仿，振蕩混勻后室溫放置15min。(4)4°C12,000g離心15min。(5)吸取上層水相，至另一離心管中。(6)按0.5ml異丙醇/mlTrizol加入異丙醇混勻，室溫放置5?lOmin。(7)4°C12,000g離心lOmin，棄上清，RNA沉于管底。(8)按lml75%乙醇/mlTrizol加入75%乙醇，溫和振蕩離心管，懸浮沉淀。(

7、9)4°C8,000g離心5min,盡量棄上清。(10)室溫晾干或真空干燥5?10min。(11)可用50ulH2O,TEbuffer或0.5%SDS溶解RNA樣品，55?60°C,5?10min。(12)測(cè)O.D值定量RNA濃度。1.2.3莖環(huán)實(shí)吋定量PCR法采用莖環(huán)實(shí)時(shí)定量PCR法(qRT-PCR)檢測(cè)miR-630的表達(dá)水平[5],miR-630及其內(nèi)參照逆轉(zhuǎn)錄和擴(kuò)增引物序列(上海鉑尚合成)。應(yīng)用SYBRGreen焚光定量PCR試劑來進(jìn)行測(cè)量(Takara),u6snRNA作為內(nèi)參，25μLPC

8、R反應(yīng)體系檢測(cè)miR-630的表達(dá)，qRT-PCR條件為：94°C預(yù)變性3min后，94°C30sec,45°C30sec，72°C30sec,總共有40個(gè)循環(huán)。全部反應(yīng)共設(shè)立3個(gè)復(fù)孔。然后將各反應(yīng)管中的熒光信號(hào)到達(dá)設(shè)定閾值對(duì)應(yīng)的循環(huán)數(shù)即Ct值記錄下來，對(duì)所得的數(shù)據(jù)三次重復(fù)求出平均值，然后用內(nèi)參基因U6歸一化處理，最后計(jì)算出癌與配對(duì)癌旁組織中的此物質(zhì)相對(duì)表達(dá)量。1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理對(duì)所得結(jié)果用SPSS16.0軟件進(jìn)行