細(xì)菌感染的實驗室診斷（上）ppt課件

《細(xì)菌感染的實驗室診斷（上）ppt課件》由會員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在教育資源-天天文庫。

1、第三章細(xì)菌感染的病原學(xué)診斷第一節(jié)標(biāo)本的采集和處理原則一、標(biāo)本采集的一般原則1.早期采集2.無菌采集無菌部位:嚴(yán)格無菌操作有正常菌群部位：明確目的菌；選擇合適的選擇培養(yǎng)基3.采用不同方法采集需氧菌或兼性厭氧菌厭氧菌：穿刺法采集4.采集適量標(biāo)本和適當(dāng)標(biāo)本采集有明顯病變的標(biāo)本根據(jù)病程采集不同的臨床標(biāo)本5.安全采集二、標(biāo)本的處理1.及時送檢2.運(yùn)送與保存1）根據(jù)待檢菌特點對標(biāo)本進(jìn)行冷藏、保溫或保持厭氧狀態(tài)腦脊液、血液、厭氧菌保存不能冷藏2）注意安全防護(hù)第二節(jié)細(xì)菌形態(tài)學(xué)檢查顯微鏡種類1.普通光學(xué)顯微鏡（lightmicroscope）光源：可見光2.暗視野顯微鏡（darkfieldmi

2、croscope）暗背景，菌體發(fā)光用于檢查不染色的活細(xì)菌和螺旋體的形態(tài)及運(yùn)動觀察一、不染色標(biāo)本的檢查常用方法壓滴法懸滴法毛吸管法用于檢查厭氧菌動力用途動力試驗——檢查細(xì)菌有無動力制動試驗——初步鑒定細(xì)菌三、染色標(biāo)本的檢查（一）常用染料色基：決定染料的顏色助色基：決定染料的酸堿性1.堿性染料電離后色基帶正電荷細(xì)菌染色常用，如美藍(lán)、結(jié)晶紫、堿性復(fù)紅等2.酸性染料用于細(xì)胞漿染色，如伊紅、酸性復(fù)紅、剛果紅3.復(fù)合染料（中性染料）堿性染料與酸性染料的復(fù)合物，如瑞氏染料、姬姆薩染料等4.單純?nèi)玖先缣K丹染料，溶于脂肪溶劑，不溶于水，化學(xué)親和力低（二）常用的細(xì)菌染色法單染色法只用一種染料，如呂

3、氏美藍(lán)復(fù)染色法用兩種或兩種以上不同顏色的染料細(xì)菌染色的一般程序1.涂片2.干燥：自然干燥為好3.固定4.初染5.媒染媒染劑6.脫色脫色劑7.復(fù)染1.革蘭染色法（Gramstain）（1）原理1）細(xì)胞壁學(xué)說：兩種細(xì)菌細(xì)胞壁通透性不同2）等電點學(xué)說3）化學(xué)學(xué)說：兩種細(xì)菌含有RNA鎂鹽不同（2）方法：制片→結(jié)晶紫初染→碘液媒染→酒精脫色→復(fù)紅復(fù)染→結(jié)果革蘭陽性菌﹙G＋﹚：紫色革蘭陰性菌﹙G－﹚：紅色（3）影響染色結(jié)果的因素操作技術(shù)：涂片和脫色染色液：細(xì)菌：18~24h培養(yǎng)物為好（4）意義:鑒別細(xì)菌選擇藥物與致病性有關(guān)2.抗酸染色法細(xì)菌著色后不被鹽酸酒精脫色的染色方法染料：石炭酸復(fù)紅、

4、鹽酸酒精、美藍(lán)方法初染：5%石炭酸復(fù)紅加熱染色5min脫色：3%鹽酸酒精復(fù)染：呂氏美藍(lán)3.熒光染色金胺O法4.特殊染色法細(xì)胞壁染色、莢膜染色、芽胞染色、鞭毛染色、異染顆粒染色5.負(fù)染法背景著色肺炎鏈球菌莢膜染色墨汁負(fù)染法芽胞染色第三節(jié)細(xì)菌分離培養(yǎng)和鑒定一、培養(yǎng)基的種類和選擇培養(yǎng)基（culturemedium）：由人工方法配制而成的，專供微生物生長繁殖使用的混合營養(yǎng)物制品。（一）培養(yǎng)基的組成成分1.營養(yǎng)物質(zhì)碳源、氮源、無機(jī)鹽、水、生長因子（1）蛋白胨提供氮源植物胨:大豆動物胨：牛肉、動物組織等（2）肉浸液碳源、氮源（3）牛肉膏氮源（4）糖（醇）類碳源和能源（5）血液提供特殊生長因

5、子、觀察溶血（6）無機(jī)鹽類常用元素：P、S、K、Na、Mg、Ca、Fe等微量元素：Co、Zn、Mn、Cu、Mu等（7）雞蛋與動物血清用于某些特殊培養(yǎng)基（8）生長因子維生素、氨基酸、嘌呤、嘧啶等2.凝固物質(zhì)即賦形劑（1）瓊脂（2）明膠動物膠原組織熬制而成3.抑制劑和指示劑（1）抑制劑：膽鹽、煌綠、染料、抗生素等選擇培養(yǎng)基：加入一定種類的抑制劑，以抑制雜菌生長或減少生長，有利于檢出菌生長的培養(yǎng)基。（2）指示劑：酚紅、中性紅、中國藍(lán)等鑒別培養(yǎng)基：加入特定底物和指示劑（二）培養(yǎng)基的種類1.按培養(yǎng)基的物理性狀（1）液體培養(yǎng)基：增菌不含瓊脂（2）固體培養(yǎng)基：純化，增菌瓊脂：1.5%~2.0

6、%（3）半固體培養(yǎng)基：動力檢測，保種瓊脂：0.3%~0.5%液體培養(yǎng)基固體斜面培養(yǎng)基半固體培養(yǎng)基2.按營養(yǎng)成分和用途分類（1）基礎(chǔ)培養(yǎng)基：只有基本營養(yǎng)成分（2）營養(yǎng)培養(yǎng)基：加有血液、血清等（3）鑒別培養(yǎng)基：含有特定底物和指示劑（4）選擇培養(yǎng)基：含有抑制劑（5）特殊培養(yǎng)基：厭氧、細(xì)菌L型（三）培養(yǎng)基的選擇1.血平板最常用2.巧克力血平板奈瑟菌屬、流感嗜血桿菌3.腸道選擇培養(yǎng)基分離腸道細(xì)菌常用中國藍(lán)、EMB、MAC、SS4.堿性瓊脂或TCBS分離霍亂弧菌5.血液增菌培養(yǎng)基血液、骨髓增菌用6.營養(yǎng)肉湯增菌用臨床標(biāo)本常規(guī)選擇培養(yǎng)基1.除糞便標(biāo)本外常規(guī)選擇血平板2.糞便標(biāo)本選擇腸道選擇培

7、養(yǎng)基3.有正常菌群存在的部位除血平板外，另外再選擇1~2種相應(yīng)的選擇培養(yǎng)基4.骨髓、血液需增菌5.懷疑奈瑟菌屬、嗜血桿菌屬感染選擇巧克力色血平板（骨髓、血液、腦脊液）6.除糞便血液外需涂片提示，特殊培養(yǎng)需臨床提示（四）培養(yǎng)基的制備1.常用各種器具滅菌前的準(zhǔn)備（1）培養(yǎng)皿：用紙包裹（2）試管：加塞后用紙包好（3）吸管和毛細(xì)管（4）三角燒瓶2.培養(yǎng)基制備的一般程序（1）調(diào)配根據(jù)培養(yǎng)基組成，準(zhǔn)確稱取各組分，先加需要蒸餾水的一部分，再加培養(yǎng)基干粉，最后補(bǔ)足水量。（2）溶化液體培養(yǎng)基不需加熱（3）調(diào)整