大鼠在體小腸吸收實驗

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1、實驗一、大鼠在體小腸吸收實驗一、實驗目的1．掌握大鼠在體小腸吸收的實驗方法。2．掌握計算藥物的吸收速度常數(shù)（Ka），以及每小時吸收率的計算方法。二、實驗指導大多數(shù)藥物以被動擴散方式從生物膜的高濃度側(cè)通過膜向低濃度側(cè)轉(zhuǎn)運。被動擴散可用Fick第一定律來描述。該定律指出，擴散速度（dC/dt）正比于膜兩側(cè)的濃度差（ΔC），因此有：（1）式中C是消化道中藥物濃度，Cb是血液中藥物濃度，Ka是吸收速度常數(shù)，其值大小取決于藥物的擴散常數(shù)，吸收膜的厚度與面積，及藥物對膜的穿透性。胃腸道吸收的生物學過程包括這樣一個系統(tǒng)，即藥物從胃腸道屏障的一側(cè)

2、（吸收部位）向另一側(cè)（血液）擴散。因為進入血液的藥物很快分布到全身，故與吸收部位比較，血中藥物濃度維持在很低的水平。幾乎在所口服給藥的情況下，對于胃腸道來說，血液（室）的作用尤如一個“水槽”（sink）。并且在整個吸收相保持很大的濃度梯度，C＞＞Cb，則ΔC≈C，于是（1）式可以簡化為（2）此為一級速度方程式的標準形式。胃腸道按一級動力學從溶液中吸收大多數(shù)藥物。用消化液中藥物量的變化（dXa/dt）表示擴散速度，則：(3)將（3）式積分，并在方程兩側(cè)同取對數(shù)。(4)式中Xa為消化液中藥物量，Xa（0）為零時刻消化液中藥物量，Ka為

3、藥物吸收速度常數(shù)。以lnXa對t作圖得一條直線，其斜率為藥物在小腸中的吸收速度常數(shù)（Ka）。三、實驗內(nèi)容與操作1．儀器蠕動泵；分光光度計；紅外燈；手術(shù)剪；止血鉗；乳膠管；燒杯；固定板；電熱恒溫水浴鍋。2．試劑（1）0．1%NaNO2液；（2）0.5%氨基磺酸銨（NH2SO3NH4）溶液；（3）0.1%二鹽酸萘乙二胺溶液（偶合試劑）；（以上置冰箱保存），(4)1mol/LHCl;(5)0.2mol/LNaOH;(6)生理鹽水；（7）Krobs-Ringer試液（每1000ml內(nèi)含NaCl7.8g，KCl0.35g，CaCl20.37

4、g，NaHCO31.37g，NaH2PO40.32g，MgCl20.02g，葡萄糖1.4g）；（8）戊巴比妥鈉溶液（10mg/ml，大鼠每100g腹腔注射0.4ml麻醉。）；（9）磺胺嘧啶（Sulfadiazine，SD）。3．操作(1)取85ml供試液（100mlKrobs-Ringer試液含SD2mg、酚紅2mg）加入循環(huán)裝置的燒瓶中。（2）將實驗前禁食一夜，體重200g左右的雄性大鼠，稱重，腹腔注射戊巴比妥鈉（劑量為100g體重注射0.4ml），麻醉后并加以固定。（3）沿腹中線打開腹腔（約3厘米長）。自十二指腸上部及回腸下部

5、各剪開一個小口，各插入直徑為0.5cm的玻璃管，用線扎緊，并用37℃的生理鹽水將小腸內(nèi)容物沖洗干凈，然后將大鼠串聯(lián)到循環(huán)裝置中。（4）開動蠕動泵，以5ml/分的流速循環(huán)10分鐘后流速調(diào)至2.5ml/分。（5）自燒瓶中取樣1.5ml（1ml、0.5ml各一份）為藥物和酚紅零時間樣品，并補加2ml酚紅溶液（每毫升Krobs-Ringer試液含酚紅20μg）其后每15分鐘取樣（1ml、0.5ml各一份），同時補加酚紅溶液。由于酚紅不被小腸吸收，用以測定水被小腸吸收的量。4．定量方法（1）磺胺嘧啶的定量取樣品1ml，加入1mol/LHCl

6、5ml，加入0.1%NaNO21ml，搖勻，放置3分鐘，加入0.5%氨基磺酸銨1ml，搖勻，放置3分鐘。加入0.1%萘乙胺2ml，搖勻，放置20分鐘。在550nm處測定吸收度。參比溶液的配制：取1ml供試液按磺胺嘧啶的定量方法但不加萘乙胺顯色劑。（2）酚紅定量樣品0.5ml，加入0.2mol/LNaOH5ml，搖勻，在550nm測定吸收度。參比溶液：酚紅的比色空白液為0.2mol/LNaOH。5．標準曲線的制備（1）酚紅的標準曲線精密稱取酚紅100mg，置1000ml容量瓶內(nèi)，加1%Na2CO3溶液溶解并稀釋至刻度，制成100μg

7、/ml的標準溶液。取1，2，3，4，5，6ml的標準溶液于10ml容量瓶中，加蒸餾水至刻度。自上述各溶液中吸取0.5ml，按酚紅的定量方法測定吸收度，并繪制標準曲線。（2）SD的標準曲線貯備液的配制：精密稱取磺胺嘧啶標準品10mg，置100ml容量瓶中，以蒸餾水溶解并稀釋至刻度，使成100μg/ml的標準溶液。標準曲線制備：取上述貯備液適量，稀釋至20μg/ml的工作液，分別吸取2，4，6，8，10ml于10ml容量瓶中，加蒸餾水至刻度。從上述溶液中各吸取1ml按SD定量方法測定吸收度，并繪制標準曲線。四、實驗結(jié)果與討論將實驗數(shù)據(jù)

8、按表1中公式進行計算，以剩余藥量的對數(shù)對時間作圖，求出吸收速度常數(shù)Ka，和每小時吸收率（%）。每小時吸收率（%）=×100%表1大鼠在體小腸吸收量的計算式取樣時間（hr）S吸收度D濃度酚吸收度紅濃度供試液體積（ml）剩余藥量（μg）循環(huán)前AoC0V