文章下載-中國(guó)水產(chǎn)科學(xué)

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1、第621期李盛文等:松浦紅鏡鯉保種群體的遺傳結(jié)構(gòu)王衛(wèi)軍等:短蛸繁殖行為及胚胎發(fā)育過(guò)程77DOI:10.3724/SP.J.1118.2014.00067松浦紅鏡鯉保種群體的遺傳結(jié)構(gòu)李盛文1,2,賈智英1,柏盈盈1,2,李池陶1,石連玉11.中國(guó)水產(chǎn)科學(xué)研究院黑龍江水產(chǎn)研究所,黑龍江哈爾濱150070;2.上海海洋大學(xué)水產(chǎn)與生命學(xué)院,上海201306摘要:應(yīng)用35對(duì)多態(tài)性較高的微衛(wèi)星標(biāo)記對(duì)鯉新品種——松浦紅鏡鯉(Cyprinuscarpiovar.songpuredmirrorcarp)的保種群體進(jìn)行了遺傳結(jié)構(gòu)研究。結(jié)果顯示,在91尾松浦紅鏡鯉個(gè)體中,共檢測(cè)到140個(gè)等位基因,每個(gè)位點(diǎn)等

2、位基因數(shù)3~6個(gè),平均有效等位基因數(shù)為3.0426;期望雜合度范圍為0.3750~0.8274,均值為0.6493;多態(tài)信息含量范圍為0.396~0.912,均值為0.5869;哈迪?溫伯格平衡檢驗(yàn)結(jié)果表明群體處于不平衡狀態(tài);平均固定系數(shù)為-0.026,說(shuō)明該群體存在雜合子過(guò)剩現(xiàn)象;瓶頸效應(yīng)分析表明,群體已經(jīng)歷了瓶頸效應(yīng);根據(jù)連鎖不平衡方法計(jì)算有效群體大小為31.2。該研究表明松浦紅鏡鯉遺傳多樣性較為豐富,為了在下一步保種工作中避免或降低瓶頸效應(yīng),應(yīng)加強(qiáng)保護(hù)工作,從而保持其豐富遺傳多樣性和優(yōu)良的經(jīng)濟(jì)性狀。關(guān)鍵詞:短蛸;繁殖行為;胚胎發(fā)育松浦紅鏡鯉;微衛(wèi)星;群體遺傳結(jié)構(gòu);保種中圖分類(lèi)號(hào):

3、S917Q959;S96文獻(xiàn)標(biāo)志碼:A文章編號(hào):1005-8737-(20102014)06011-0067-08第621期李盛文等:松浦紅鏡鯉保種群體的遺傳結(jié)構(gòu)王衛(wèi)軍等:短蛸繁殖行為及胚胎發(fā)育過(guò)程77松浦紅鏡鯉(Cyprinuscarpiovar.songpuredmirrorcarp)是以荷包紅鯉(Cyprinuscarpiovar.wuyuanensis)為母本,以散鱗鏡鯉(CyprinuscarpiohaematopterusTemm.etSch.)為父本雜交后分離出來(lái)的紅色個(gè)體為選育基礎(chǔ)群,以生長(zhǎng)快、體色橘紅、紡錘形、鱗被框形為選育指標(biāo),采取多性狀群體選育與分子生物學(xué)技術(shù)相結(jié)

4、合的育種技術(shù),育成的一個(gè)集觀賞、食用為一體的鯉新品種。該品種于2011年12月通過(guò)全國(guó)水產(chǎn)原種和良種審定委員會(huì)的審定,品種登記號(hào):GS01-001-2011。在水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)中,隨著魚(yú)類(lèi)新品種的不斷問(wèn)世,如何保持新品種優(yōu)良經(jīng)濟(jì)性狀不僅成為育成品種需要解決的重要問(wèn)題,也是漁業(yè)是否能夠穩(wěn)定快速發(fā)展的根本問(wèn)題,因此對(duì)選育品種的有效管理至關(guān)重要。微衛(wèi)星標(biāo)記技術(shù)在水產(chǎn)上的應(yīng)用現(xiàn)已成熟,目前鯉微衛(wèi)星標(biāo)記已經(jīng)得到大規(guī)模的篩選[1?3],而且在種質(zhì)資源管理方面得到較為廣泛和有效的應(yīng)用,如賈智英等[4]、石連玉等[5]分別對(duì)松浦鯉和松荷鯉保種群體遺傳多樣性和遺傳結(jié)構(gòu)進(jìn)行了研究,表明人工選擇壓力對(duì)保種群體造成

5、較大影響,但其仍具有較豐富的遺傳多樣性。李建林等[6]利用微衛(wèi)星標(biāo)記分析了建鯉的種質(zhì)資源,表明建鯉群體遺傳多樣性水平較高,具有較大的選育潛力。而有關(guān)松浦紅鏡鯉保種群體遺傳結(jié)構(gòu)方面的研究至今未見(jiàn)相關(guān)報(bào)道。本研究針對(duì)這一情況選取了35個(gè)微衛(wèi)星標(biāo)記進(jìn)行松浦紅鏡鯉遺傳結(jié)構(gòu)方面的研究,分析其遺傳多樣性參數(shù),從而為松浦紅鏡鯉種質(zhì)資源的可持續(xù)發(fā)展奠定基礎(chǔ)。1材料與方法1.1材料松浦紅鏡鯉91尾,采自黑龍江水產(chǎn)研究所松浦實(shí)驗(yàn)站。樣品均剪取鰭條,放入盛有75%酒精的1.5mL離心管中,帶回實(shí)驗(yàn)室放入-20℃冰箱保存。1.2方法1.2.1DNA提取和引物來(lái)源采用酚-氯法[7]提取基因組DNA,經(jīng)瓊脂糖凝膠

6、(膠濃度1%)電泳和紫外分光光度法檢測(cè)其純度和濃度,稀釋成50ng/μL質(zhì)量濃度作為PCR第621期李盛文等:松浦紅鏡鯉保種群體的遺傳結(jié)構(gòu)王衛(wèi)軍等:短蛸繁殖行為及胚胎發(fā)育過(guò)程77擴(kuò)增的模板。微衛(wèi)星引物查閱相關(guān)文獻(xiàn)[8?10],由上海博尚生物技術(shù)有限公司合成。1.2.2PCR擴(kuò)增PCR反應(yīng)體系25μL,模板DNA30~50ng,2×EsTagMasterMix12.5μL(康為世紀(jì)生物公司,產(chǎn)品號(hào)CW0690)上、下游引物各1μL(10μmol/μL),用滅菌雙蒸水補(bǔ)足體積。反應(yīng)條件為:95℃預(yù)變性5min;94℃變性30s,最適退火溫度退火30s,72℃延伸30s,24~30個(gè)循環(huán);7

7、2℃延伸5min,4℃保存。1.2.3電泳及染色PCR產(chǎn)物用8.0%的非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳分離。電泳結(jié)束后,用硝酸銀染色后拍照記錄電泳結(jié)果。電泳圖譜利用Gel-proanalyzer4．5軟件分析,結(jié)合PCR產(chǎn)物長(zhǎng)度及雙核苷酸重復(fù)確認(rèn)片段大小并判定基因型。1.2.4數(shù)據(jù)分析利用PopGene(Version3.2)[11]軟件分別對(duì)觀測(cè)等位基因數(shù)(observednumberofalleles,A)、有效等位基因數(shù)(effectivenum