冠心活血膠囊有效提取部位研究

《冠心活血膠囊有效提取部位研究》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在工程資料-天天文庫(kù)。

1、冠心活血膠囊有效提取部位研宄樊越瀾(內(nèi)蒙古頭市鋼第三職工醫(yī)院014010)【中圖分類號(hào)】R29【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A【文章編號(hào)】1672-5085(2013)07-0026-02【摘要】目的通過(guò)正交設(shè)計(jì)，觀察冠心活血膠囊不同提取部位含藥血清對(duì)過(guò)氧化氫(H2O2)誘導(dǎo)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(ECV304)氧化損傷的影響。方法利用血清藥理學(xué)方法制備冠心活血膠囊不同提取部位的含藥血清，在體外H2O2干預(yù)建立ECV304細(xì)胞氧化損傷模型。四甲基偶氮唑鹽(MTT)法檢測(cè)冠心活血膠囊不同提取部位對(duì)H2O2誘導(dǎo)的ECV304細(xì)胞氧化損傷的影響。結(jié)果冠心活血膠囊

2、中揮發(fā)油和丹參等四味藥材的醇提物只有抗氧化作用，丹參等四味藥材的水提物和檀香等藥材的水提物沒(méi)有抗氧化作用。結(jié)論得出冠心活血膠囊原藥中發(fā)揮抗氧化作用的活性部位，進(jìn)而可以考慮優(yōu)化制備工藝。【關(guān)鍵詞】冠心活血膠囊血清藥理學(xué)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞抗氧化冠心活血膠囊是蒙醫(yī)臨床使用多年的驗(yàn)方，由檀香、降香、紫檀香、肉豆蔻、丹參、廣棗、沙棘、沉香、山奈、蓽茇十味蒙藥材組成。具有活血化瘀［1］，強(qiáng)心止痛的功效。臨床用于治療冠心病，心煩心悸，心絞痛。但因其成分復(fù)雜,服藥劑量大，影響臨床應(yīng)用，故在原處方基礎(chǔ)上進(jìn)行工藝改進(jìn)，運(yùn)用正交設(shè)計(jì)方法和血清藥理學(xué)方法探討冠

3、心活血方劑不同提取成分含藥血清對(duì)過(guò)氧化氫誘導(dǎo)的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞氧化損傷的影響。以期為進(jìn)一步的工藝研究奠定基礎(chǔ)。1.實(shí)驗(yàn)材料與試劑1.1動(dòng)物及細(xì)胞株Wistar大鼠，雌雄各半(180±20)g，由內(nèi)蒙古大學(xué)動(dòng)物中心提供，人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(ECV340),購(gòu)自中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心。1.2藥物及試劑試劑青霉素-鏈霉素雙抗，胎牛血清，胰蛋白酶，甲基偶氮唑鹽，DMSO液京，RPMIMedium1640,雙氧水H2O2。1.3儀器C02培養(yǎng)箱，低溫離心機(jī)，倒置顯微鏡，酶標(biāo)儀，PHS-25型PH計(jì)，78-1磁力加熱攪拌器，電熱恒溫干

4、燥箱1.實(shí)驗(yàn)方法及過(guò)程2.1樣品藥物的制備2.1.1考察因素及水平：根據(jù)冠心活血膠囊制備工藝，設(shè)計(jì)冠心活血膠囊的有效部位為揮發(fā)汕、丹參等醇提物、丹參等水提物、檀香等水提物。2.1.2藥物的提取2.1.2.1制備丹參等醇提物2.1.2.2制備丹參等水提物2.1.3按L9（34）正交設(shè)計(jì)表配制藥物，得9份樣品藥物。2.2含藥血清的制備將樣品藥物給大鼠灌胃，1.5ml/l00g,每天2次，連續(xù)5天，腹主動(dòng)脈采血，靜置30min于4°C于3000r/min離心15min，分離血清，56°C火活30min,微孔濾膜過(guò)濾除菌。收集血清，備用。2.

5、3人臍靜脈細(xì)胞（ECV340）培養(yǎng)ECV340常規(guī)方法培養(yǎng)：以含10%胎牛血清，1%的雙抗的1640培養(yǎng)液培養(yǎng)ECV340細(xì)胞，置于37°C,5%CO2條件培養(yǎng)，定期換液，待細(xì)胞進(jìn)入對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，用0.25%胰蛋白酶消化傳代。96孔板的接種：取生長(zhǎng)良好的對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞，用0.25%的胰酶消化，制成細(xì)胞懸液，以5*104/ml的密度接種于96孔板上（每孔100ul）,培養(yǎng)24小吋后,換為含5%胎牛血清1640培養(yǎng)液培養(yǎng)24h后細(xì)胞生長(zhǎng)至50%-60%用于實(shí)驗(yàn)。2.4篩選過(guò)氧化氫氧化損傷的最適濃度以終濃度為100[2]、200、400、60

6、0umol/L過(guò)氧化氫干預(yù)接種于96孔板的ECV340細(xì)胞，每組8孔，干預(yù)12h后，吸棄培養(yǎng)液，加無(wú)血清培養(yǎng)液和H2O2,MTT法檢測(cè)細(xì)胞活力，即每孔加5g/L的MTT液10μL，培養(yǎng)4h后吸棄75ul培養(yǎng)液，再加75ul二甲基亞砜（DMSO）并震蕩。用酶標(biāo)儀（波長(zhǎng)為490nm及570nm）檢測(cè)吸光度A值。得出H2O2濃度為200umol/L吋效果較好，另外結(jié)合有關(guān)H2O2對(duì)細(xì)胞損傷的相關(guān)文獻(xiàn)［3,4］，所以本實(shí)驗(yàn)H2O2的濃度為200umo/L。2.5MTT法檢測(cè)含藥血清對(duì)細(xì)胞氧化損傷的影響2.5.1冠心活血膠囊原藥的含藥血清

7、的抗氧化活性的考察選取8只wistar大鼠，隨機(jī)分為2組，即原藥組、陽(yáng)性對(duì)照組，制備含藥血清（處理方法同2.2）。取細(xì)胞培養(yǎng)板，每孔加入經(jīng)微孔濾膜火菌的1640培養(yǎng)液lOOul,每組設(shè)8復(fù)孔，分為以下幾組：（1）含原藥血清組，（2）陽(yáng)性對(duì)照組（3）模型組，（4）陰型對(duì)照組。（1）（2）兩組每孔加血清20ul,預(yù)處理8h,（1）?（3）組加終濃度為200umol/L的H2O2和終濃度同前的含藥血清（血清占總體積的1/5）繼續(xù)培養(yǎng)12h后，然后加入10ul濃度為5g/L的MTT，培養(yǎng)4h，再加入75ul的DMSO,用酶標(biāo)儀測(cè)定96孔板在5

8、70nm及490nm處的吸收值，記錄數(shù)據(jù)，進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。2.5.2冠心活血膠囊不同提取部位抗氧化活性的考察選取大鼠40只wistar大鼠，隨機(jī)分成10組，分別為（1）?（9）給藥組（9種樣品藥），（10）陽(yáng)性對(duì)照組。制