hplc法測定黔產(chǎn)鉤藤中鉤藤堿及異鉤藤堿含量

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1、HPLC法測定黔產(chǎn)鉤藤中鉤藤堿及異鉤藤堿含量【】目的：研究建立了黔產(chǎn)鉤藤藥材中鉤藤堿與異鉤藤堿的含量測定方法。方法：采用HPLC法：KromosilC18色譜柱（250mm×4.6mm，5μm）；流動相以甲醇-0.2%氨水溶液(65：35)，流速：1.0mL·min-1，柱溫：35℃；進樣器溫度：5℃；檢測波長為245nm，結(jié)果：異鉤藤堿和鉤藤堿分別在0.13064～1.17576μg（r=1.0000）和0.09744～0.87696μg（r=0.9998）范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。異鉤藤堿平均回收率（n=6）為98.88%，RSD為0.38％：鉤藤堿平均回收率（n=6）為98.28%，RS

2、D為0.72％；結(jié)論：本檢測方法快速、簡便、靈敏、準確、可靠，重復(fù)性好，為黔產(chǎn)鉤藤藥材的質(zhì)量控制提供了科學(xué)依據(jù)。　　【關(guān)鍵詞】黔產(chǎn)鉤藤；HPLC鉤藤堿；異鉤藤堿；含量測定　　貴州道地藥材鉤藤,為茜草科茜草屬鉤藤的干燥帶鉤枝莖。作為常用的中藥材之一，具有清熱平肝，熄風(fēng)定驚的作用。主要用于頭痛眩暈、感冒夾驚、驚癇抽搐、妊娠子癇，以及高血壓等癥?，F(xiàn)代研究表明，鉤藤的主要有效成分是總生物堿，其中以鉤藤堿與異鉤藤堿為主，具有降血壓、抗心律失常以及抗血小板聚集和抗血栓形成的作用，目前，隨著醫(yī)藥科技的發(fā)展，由于鉤藤的深入開發(fā)研究，鉤藤的功能效用在不斷擴大，己越來越受到人們關(guān)注。由于鉤藤的臨床應(yīng)用極為廣泛，

3、現(xiàn)有較多的制劑使用鉤藤作為主要原料藥材。因此，利用鉤藤制成的具有降血壓、抗心律失常等治療各種病癥的復(fù)方制劑較多，如潛陽降壓膠囊、天鉤靈膠囊等，特別是進幾年來利用鉤藤提取制成的鉤藤堿靜脈注射液，具有抗腦血栓的作用。目前評價鉤藤質(zhì)量優(yōu)劣的標(biāo)準，多以鉤藤堿和異鉤藤堿的含量為指標(biāo)。因此，我們采用合適、簡便的方法提取鉤藤中的鉤藤堿與異鉤藤堿，并采用快速、準確的RP-HPLC法測定其含量，有助于黔產(chǎn)鉤藤藥材的質(zhì)量控制?！　?儀器與試藥　　高效液相色譜儀；美國adulephotodiodeArroyDetebo高效液相自動進樣及分離系統(tǒng);poosilC18柱(4.6mnl×250mm，5m)，以甲醇-0.

4、2%氨水溶液(65：35)為流動相；流速：1.0mL·min-1；柱溫：35℃：進樣器溫度：5℃；檢測波長為245nm。鉤藤堿及異鉤藤堿的檢測波長均為245nm；理論塔板數(shù)按鉤藤堿和異鉤藤堿，峰面積計算應(yīng)不底于3000；進樣量10?！　?.2對照品溶液的制備：精密稱取鉤藤堿和異鉤藤堿對照品加甲醇制成每1mL含60μg和每1mL含80μg的混合溶液，即得?！　?.3供試品溶液的制備：取本品粉末(過3號篩)約0.3g，精密稱定，加入氯仿:甲醇（5:1）的混合溶劑20mL，冰箱5℃放置過夜，加0.5mL氨水，低溫超聲40分鐘，過濾，用氯仿:甲醇（5:1）的混合溶劑洗滌容器及濾渣，濾液置蒸發(fā)皿中，在

5、65℃水浴上揮干，殘渣加甲醇定容置3mL容量瓶中，搖勻，微孔濾膜過濾，既得?！　?.4線性關(guān)系考察：精密稱取鉤藤堿和異鉤藤堿對照品適量加甲醇制成每1mL含0.05646mg·mL-1的鉤藤堿溶液。和每1mL含0.083751mg·mL-1的異鉤藤堿溶液。精密吸取上述混合對照品溶液2ul、6ul、10ul、14ul、18ul、按順序進樣，按上述色譜條件測定峰面積，以峰面積為縱坐標(biāo)，異鉤藤堿和鉤藤堿為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準曲線，計算回歸方程：異鉤藤堿Y=2042275.6939X-1710.2281，r=1.0000結(jié)果表明異鉤藤堿在0.13064~1.17576μg進樣量與峰面積的線性關(guān)系良好。鉤藤

6、堿Y=2466259.2365X13438.5000，r=0.9998結(jié)果表明鉤藤堿在0.09744~0.87696μg進樣量與峰面積的線性關(guān)系良好?！　?.5精密度實驗：精密吸取同一濃度的混合對照品溶液，重復(fù)進樣6次，每次10μL，鉤藤堿峰面積RSD為0.02%，精密度良好。異鉤藤堿峰面積RSD為0.03%，密度良好?！　?.6穩(wěn)定性實驗：取供試品溶液，按0、2、4、8、12、24h進樣，每次進樣10μL，異鉤藤堿峰面積RSD為0.30%，鉤藤堿峰面積RSD為0.31%，表明樣品在24小時內(nèi)穩(wěn)定?！　?.7重復(fù)性實驗：取榕江鉤藤藥材粉末（過3號篩）約0.3g精密稱定，按樣品測定方法，平行制

7、備6份供試品溶液，分別注入高效液相色譜儀測定，異鉤藤堿含量平均值為0.06307%；RSD為0.31%。鉤藤堿含量平均值為0.04345%；RSD為0.85%。重復(fù)性良好?！　?.8回收率考察實驗：采用加樣回收法，精密稱取已知異鉤藤堿質(zhì)量分數(shù)為0.6307mg/g,鉤藤堿質(zhì)量分數(shù)為0.4345mg/g的樣品6份，分別精密加入一定量的異鉤藤堿和鉤藤堿對照品溶液，按供試品溶液的制備方法制備，按上述色譜條件測定,在