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1、非小細胞肺癌組織中SP70的表達及意義 摘要：目的初步探討非小細胞肺癌（NSCLC）組織中SP70抗原表達的臨床意義。方法采用RT-PCR法檢測40例肺癌組織（NSCLC32例，小細胞肺癌8例）和20例肺良性病變組織中SP70抗原表達的相對水平，半定量分析其臨床意義。結(jié)果肺癌組SP70平均表達水平明顯高于肺良性病變組（P0.05）。結(jié)論SP70可能是評價NSCLC的一個潛在的指標(biāo)?！ ￡P(guān)鍵詞：SP70抗原；非小細胞肺癌；RT-PCR Abstract：ObjectiveToinvestigatethenon-smallcelllungcancer（NSCLC）clinica
2、lsignificanceofexpressionofSP70antigenintissues.MethodsRT-PCRmethodwasusedtodetect40casesoflungcancer（32cases，NSCLC8casesofsmallcelllungcancer）relativetothelevelofexpressionofSP70antigenand20casesofbenignlunglesion，semiquantitativeanalysisanditsclinicalsignificance.ResultsThemeanlevelofSP70i
3、nlungcancergroupwassignificantlyhigherthanthatinbenignlungdiseasegroup（P0.05）.ConclusionSP70maybeapotentialindicatorofNSCLC. Keywords：SP70antigen；Nonsmallcelllungcancer；RT-PCR 非小?胞肺癌（NSCLC）約占所有肺癌的80%，其死因大多是由于肺癌早期診斷率低且預(yù)后差[1]，尋求肺癌早期檢測指標(biāo)及方法成為目前研究熱點。近年來，潘世揚等[2-3]研究發(fā)現(xiàn)一株能特異性識別NSCLC的McAbNJ00l，此抗體
4、對NSCLC的免疫性診斷和治療意義重大，其所針對的靶抗原為相對分子質(zhì)量70000的胞漿新抗原SP70，SP70與NSCLC關(guān)系密切。本實驗采用RT-PCR法檢測40例NSCLC組織和15例良性病變肺組織中SP70的表達水平，分析其表達與臨床特征的關(guān)系，評價其在臨床診治中的應(yīng)用價值?！ ?資料與方法 1.1一般資料取我院2014年3月～2015年3月手術(shù)切除的未經(jīng)放化療的肺腫瘤標(biāo)本40例，另取20例手術(shù)切除的肺良性病變組織作為對照，全部標(biāo)本均有病理確診，收集后立即保存于-80℃冰箱。Trizol液和逆轉(zhuǎn)錄試劑盒購自美國Invitrogen公司。引物由北京諾賽基因公司設(shè)計并合成，
5、目的基因SP70F：5′-CCAGTTCAAGTGCTCGGCAT-3′；R：5′-TTGCTCTTGGAACCTCGGAC-3′。內(nèi)參β-actinF：5′GTGACGTTGACATCCGTAAAGACC-3′；R：5′-CTAGGAGCCAGGGCAGTAATCT-3′?！ ?.2實驗方法按Trizol裂解抽提法進行總RNA的提取。常規(guī)檢測RNA的濃度、純度及完整性。按逆轉(zhuǎn)錄試劑盒提供的方法合成cDNA存放-20℃冰箱備用。25μlRT-PCR擴增體系：PCRreactionmixture12.5μl，上、下游引物（10pmol/μl）各1μl，cDNA模板1μl，ddH2
6、O10.5μl。反應(yīng)條件：94℃預(yù)變性5min，94℃40s，55℃30s，72℃40s，共30個循環(huán)，每份樣本重復(fù)3次。 1.3統(tǒng)計學(xué)方法用SPSS17.0軟件對實驗數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析。統(tǒng)計數(shù)據(jù)采用灰度值表示，以β-actin灰度值為參照，標(biāo)化計算各樣本數(shù)據(jù)，從而獲得SP70的相對模板數(shù)，即：SP70/β-actin。計量資料采用（x±s）表示，兩樣本均數(shù)的比較采用t檢驗；以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。 2結(jié)果 2.1目的片段將PCR產(chǎn)物進行2%瓊脂糖凝膠電泳分析證實PCR產(chǎn)物長度與目標(biāo)基因SP70長度一致，最后經(jīng)測序確認為目的產(chǎn)物，如圖1?！ ?.2SP70的表達比
7、較肺癌組SP70平均表達水平明顯高于肺良性病變組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P0.05），見表1?！ ?討論 相關(guān)研究[2-4]指出SP70是一種針對NSCLC的特異性蛋白靶標(biāo)，其存在于癌細胞的胞膜和胞漿，可促進癌細胞增殖，是肺癌檢測診斷的分子靶標(biāo)，同時也是抗肺癌治療靶點，SP70對于肺癌的診治意義重大。彭?c[4]等采用ELISA方法檢測NSCLC患者中外周血液中SP70的表達，結(jié)果發(fā)現(xiàn)NSCLC組SP70陽性率明顯高于對照組，提示SP70可能是診斷NSCLC的潛在血清腫瘤標(biāo)志物。亦有研究[5-
