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1、天津市一瑞生物工程有限公司隱球菌抗原檢測的臨床意義一瑞生物隱球菌病感染診斷現(xiàn)狀一產(chǎn)品介紹二適用科室及臨床意義三相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)四隱球菌為圓形菌體，外周有莢膜，內(nèi)有反光孢子，但無菌絲。隱球菌屬已知有37個(gè)不同的種，但具致病性的多為新型隱球菌，其特點(diǎn)是菌體由一層很厚的多糖莢膜所包被。新型隱球菌主要包括新生變種、格特變種等簡介流行病學(xué)38個(gè)ICUsof27個(gè)意大利醫(yī)院384例真菌感染(318例侵襲性念珠菌感染；63例霉菌感染；3例隱球菌感染)TortoranoAMetal.Mycoses.2011,55:73–79.HIV感染者器官移植患者接受大劑量皮質(zhì)類固醇或單克隆抗體（如阿侖單抗、英夫利昔單抗）和
2、/或其他免疫抑制劑治療的患者其他無基礎(chǔ)疾病的患者JohnR.Perfect,etc.ClinicalInfectiousDiseases2010;50:291–322美國感染病學(xué)會(huì)的“隱球菌病治療臨床實(shí)踐指南（2010年更新）”中指出，隱球菌病的易感人群主要包括：宿主因素流行病學(xué)隨著AIDS患者的增多，各種機(jī)會(huì)性感染的發(fā)病率也隨之上升，新型隱球菌成為繼白色念珠菌之后最常見的機(jī)會(huì)性感染真菌，其在HIV中的感染率已達(dá)8.5%。隱球菌性腦膜炎發(fā)生率和死亡率在發(fā)達(dá)國家達(dá)到10-30%，在發(fā)展中國家可達(dá)到50-100%。早期隱球菌感染臨床表現(xiàn)缺乏特異性，腦脊液變化不典型，但是當(dāng)發(fā)展為隱球菌性腦膜炎
3、時(shí)，死亡率可達(dá)到20%。早期、快速、準(zhǔn)確地診斷很有必要現(xiàn)有檢測手段墨汁染色（菌體）真菌培養(yǎng)（活菌）ELISA（莢膜多糖抗原）乳膠凝集法（莢膜多糖抗原）膠體金法（莢膜多糖抗原）1.印度墨汁染色：敏感性差，陽性檢出率很低2.腦脊液或血液培養(yǎng)（金標(biāo)準(zhǔn)）：陽性檢出率低，培養(yǎng)（2-10天）及鑒定時(shí)間長，易誤診3.抗原檢測試驗(yàn)：腦脊液和血清樣本抗原檢測的敏感性可達(dá)到97%和87%*，能實(shí)現(xiàn)早期快速診斷*TylerWarkentien,MD.IntJSTDAIDS.2010October;21(10):679–684.現(xiàn)有檢測手段隱球菌莢膜多糖抗原由3種不同的單糖聚合而成是引起病理變化的主要毒性因子在
4、菌體生長和繁殖過程中，GXM不斷分泌到胞外通過發(fā)揮免疫抑制作用和免疫調(diào)理作用影響宿主免疫系統(tǒng)OscarZaragoza,etc..AdvApplMicrobiol.2009,68:133–216隱球菌莢膜多糖抗原GXM(Glucuronoxylomannan,GXM)：莢膜多糖抗原是隱球菌特有的分泌物，可以作為隱球菌感染的診斷依據(jù)隱球菌病感染診斷現(xiàn)狀一產(chǎn)品介紹二臨床意義及適用科室三相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)四隱球菌抗原檢測試劑盒（膠體金法）原理隱球菌抗原檢測試劑盒（膠體金免疫層析法）試劑盒組成隱球菌抗原檢測試紙條50條樣本稀釋液滴定液陽性對照穩(wěn)定性/儲(chǔ)存方法2年有效期室溫儲(chǔ)存特點(diǎn)無需樣本預(yù)處理10分鐘得到
5、結(jié)果定性或半定量測定結(jié)果客觀血清，腦脊液，血漿樣本收集及制備按照無菌操作收集腦脊液、血漿和血清樣本。樣本最多可以在2-8℃放置72小時(shí)。不反復(fù)凍融的情況下，樣本可以在-20℃以下保存更長時(shí)間。樣本在運(yùn)輸過程中應(yīng)保持在2-8℃或者-20℃以下。定性檢測操作步驟簡單5步，10分鐘得到結(jié)果注意：若對照條帶未出現(xiàn)，則說明該檢測無效，應(yīng)重新檢測。定性檢測結(jié)果半定量檢測操作步驟1、以1:5作為初始稀釋濃度，依次1:2稀釋至1:2560。分別放置于10個(gè)微離心管中并編號(hào)1-10。2、向1號(hào)試管中加入4滴樣本稀釋液。3、分別向標(biāo)號(hào)2-10的試管中加入2滴滴定液。4、將40μL樣本加入1號(hào)試管并混勻。5、
6、從1號(hào)試管中吸取80μL樣本混合液轉(zhuǎn)移至2號(hào)試管并混勻，依次進(jìn)行稀釋直至10號(hào)試管。6、10號(hào)試管中吸取80μL樣本混合液并丟棄以保證試管內(nèi)最終體積為80μL。7、將試紙條的白端分別沒入試管中。8、等待10分鐘，讀取并記錄實(shí)驗(yàn)結(jié)果。半定量檢測操作步驟半定量檢測操作步驟-2半定量檢測(滴度)結(jié)果對于半定量滴定檢測，患者的滴度應(yīng)報(bào)告為產(chǎn)生陽性結(jié)果的最高稀釋度。質(zhì)量控制陽性對照：將1滴樣本稀釋液加入試管中，再加入1滴隱球菌抗原陽性對照。陰性對照為：將2滴樣本稀釋液加入試管中。分別插入試紙條，10分鐘后讀取結(jié)果。依據(jù)本地、國家的法規(guī)及認(rèn)證機(jī)構(gòu)的指導(dǎo)方針或要求，可能需要做額外的質(zhì)控檢測。膠體金法和
7、培養(yǎng)/墨汁染色對比CrAgLFApackageinsert(IMMY)靈敏度特異性膠體金法試劑盒95.83%99.84%墨汁染色86.39%100.00%真菌培養(yǎng)60.72%100.00%膠體金法和ELISA/乳膠凝集法對比血清型靈敏度(ng隱球菌抗原/ml)A(新型隱球菌)B(哥特隱球菌)C(哥特隱球菌)D(新型隱球菌)IMMY膠體金法1198IMMY乳膠凝集法284738062ELISA2823>2,000770其他廠家乳膠凝集
