survivin蛋白及其mrna在子癇前期患者胎盤中的表達(dá)

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1、survivin蛋白及其mRNA在子癇前期患者胎盤中的表達(dá)：李雪蘭，李春芳，王少麗，茍文麗【摘要】目的探討survivin蛋白及其mRNA的表達(dá)與子癇前期的關(guān)系。方法采用免疫組化SP法和實(shí)時(shí)熒光定量PCR(FQPCR)技術(shù)，檢測20例輕度子癇前期、25例重度子癇前期和20例正常晚孕婦女胎盤組織中survivin蛋白及其mRNA的表達(dá)情況。結(jié)果survivin蛋白主要位于絨毛小葉的合體滋養(yǎng)細(xì)胞及細(xì)胞滋養(yǎng)細(xì)胞，在子癇前期胎盤中的表達(dá)較正常晚孕婦女明顯降低，且重度子癇前期的表達(dá)明顯低于輕度;survivinm

2、RNA在子癇前期胎盤中的表達(dá)也明顯低于正常晚孕，重度明顯低于輕度。結(jié)論胎盤組織中survivin蛋白及其mRNA的異常表達(dá)可能在子癇前期的發(fā)生中起著重要的作用?！娟P(guān)鍵詞】子癇前期;胎盤;survivin　　ABSTRACT:ObjectiveTodetecttheexpressionsofsurvivinproteinandsurvivinmRNAinplacentaofenpsiaandnormalpregnancy.MethodsTheexpressionsofsurvivinproteinandsu

3、rvivinmRNAcollectedfromplacentaof45preeclampsiapatients(20casesofmildpreeclampsiaand25casesofseverepreeclampsia)and20normalpregnanteninedbyimmunohistochemistry.Theimageanalysistechniqueployedtoanalyzesurvivinprotein.RealtimeFQPCRRNA.Resultssurvivinpr

4、oteinostlyinsyncytiotrophoblastsandcytotrophoblasts,anditpsiathanthatinnormalplacenta,andsignificantlylopsiathaninmildpreeclampsia.survivinmRNApsiathaninnormalplacentaandsignificantlylopsiathaninmildpreeclampsia.ConclusionTheabnormalexpressionsofsurvivi

5、nproteinandmRNAinplacentaltissuesmayplayanimportantroleinthepathogenesisofpreeclampsia.　　KEYoticMed6.0數(shù)碼醫(yī)學(xué)圖像分析系統(tǒng)(A)進(jìn)行灰度分析(細(xì)胞平均灰度值愈小，蛋白表達(dá)愈高)?！　?.3FQPCR法檢測survivinmRNA的表達(dá)　　1.3.1RTqPCR試劑RealtimePCR試劑盒及反轉(zhuǎn)錄試劑盒(Tany)，引物設(shè)計(jì)與合成(大連寶生物工程有限公司)。survivin引物序列：正向：5′T

6、TCTCAAGGACCACCGCATC3′，　　反向：5′GCCAAGTCTGGCTCGTTCTC3′。　　1.3.2RealtimePCR反應(yīng)按AmpliQ，Cat.No.260802，Germany試劑盒要求依次加入SYBRGreenqPCRSuperMix12.5μL、Forer　　1μL、Reverseprimer1μL、cDNA1μL、DEPCtreatedin1個(gè)循環(huán);PCR反應(yīng)：95℃30s，58～60℃1min，72℃30s共40～45個(gè)循環(huán)。測定各樣本PCR反應(yīng)液的溶解曲線，鑒

7、定PCR產(chǎn)物的特異性。數(shù)據(jù)應(yīng)用儀器自帶軟件ABIPrism7300SDSSoftRNA相對(duì)表達(dá)量計(jì)算公式，βactin作為內(nèi)參照基因。按照下列公式計(jì)算樣本中目的基因mRNA的相對(duì)表達(dá)量：△CT(目的基因)=目的基因CT-內(nèi)對(duì)照基因CT，△△CT=△CT(目的基因)-△CT(標(biāo)準(zhǔn)值)，目的基因的相對(duì)總量為2-△△CT?！　?.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS13.0軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料以±s表示，統(tǒng)計(jì)學(xué)分析采用t檢驗(yàn)，P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義?！　D1正常晚孕者(A)及子癇前期(B)胎盤組織

8、中survivin蛋白的表達(dá)　　Fig.1Expressionofsurvivinproteinofplacentainnormallatepregnancy(A)andpreeclampsia(B)(SP,×400)　　2.2survivinmRNA的表達(dá)情況子癇前期胎盤組織中survivinmRNA的表達(dá)明顯低于正常晚孕組，且重度子癇前期者明顯低于輕度者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05，表1)。表1正常晚孕者與子癇