豬巨細(xì)胞病毒感染豬多器官microRNA表達(dá)譜的研究

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1、分類號Ｓ８５２．６５＋９．１學(xué)號Ｂ２０１２１９Ｏ３？，＊■ｌ－；Ｖ：／．．Ｖ－－．．、．．．＾１？ＪＣ．Ｖ－＇？＇＇＊？■■－．，ｆＡｉＳＩＣＨＵＡＮＡＧＲＩＣＵＬＴＵＲＡＬＵＮＩＶＥＲＳＩＴＹ＇１＊＊．？＞ｒ？－Ｖ：：＿．博士學(xué)位論文豬巨細(xì)胞病毒感染豬多器官ｍｉｃｒｏＲＮＡ表達(dá)譜的研究‘ｉ劉驍指導(dǎo)教師徐志文教授＾．專業(yè)名稱預(yù)防養(yǎng)醫(yī)、＇１Ｔ：．＂＇■？＊＇－？＼？．

2、．－，ｆ，－－．ｉ．．，，．－？＼．．，＂？Ｗ＇－－■？．．．．，＿研究方向動物傳染病病原分子生物學(xué)ｒ＿：多論文獨(dú)匍性聲明本人鄭重聲明：所呈交的學(xué)位論文是我個(gè)人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行研究工作所取得的成果。盡我所知，除了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，學(xué)位論文中不包含其他個(gè)人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含為獲得四川農(nóng)業(yè)大學(xué)或其它一教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位或證書所使用過的材料。與我同工作的同志對本研究所做的任何貢獻(xiàn)均已在論文中作了明確的說明并表

3、示了謝意。’又？Ｍ年？研究生簽名？減月丫曰關(guān)于論文使用授權(quán)的聲明本人完全了解四川農(nóng)業(yè)大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定：，即學(xué)校有權(quán)保留并向國家有關(guān)部門或機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和電子版，允許論文被査閱和借閱，可以采用、縮印或掃描等復(fù)制手段保存。影印、匯編學(xué)位論文同意四川農(nóng)業(yè)大學(xué)可以用不同方式在不同媒體上發(fā)表、傳播學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容。以本論文不保密。□本論文保密，在＿年解密后適用本授權(quán)。“”（請?jiān)谝陨稀鮾?nèi)劃Ｖ）研究生簽名：％一年Ｍ月ｑ日導(dǎo)師簽名：年月日豬巨細(xì)胞病窶感染豬多器官

4、ｍｉｃｒｏＲＮＡ表達(dá)譜的研究中文摘要豬巨細(xì)胞病毒（Ｐｏｒｃｉｎｅｃｙｔｏｍｅｇａｌｏｖｉｒｕｓ，ＰＣＭＶ）屬于巨細(xì)胞病毒屬，皰疹病毒科，ｐ皰ｙ疹病毒亞科。豬巨細(xì)胞病毒具有二十面體結(jié)構(gòu)并具有雙鏈線狀ＤＮＡ基因組。ＰＣＭＶ已經(jīng)在世界各地廣泛流行，包括中國、英國、德國、美國、日本在內(nèi)的國家都己證實(shí)了ＰＣＭＶ一。的流行，并對養(yǎng)殖業(yè)造成嚴(yán)重威脅ＰＣＭＶ是種免疫抑制病毒，主要抑制Ｔ淋巴細(xì)胞及巨噬細(xì)胞系統(tǒng)免疫功能，但其對免疫系統(tǒng)抑制的機(jī)制并不明確。為了研究ＰＣＭＶ對宿主免疫器官功能的潛在影響，我們使用轉(zhuǎn)錄組芯

5、片技術(shù)對ＰＣＭＶ感染的重要豬中樞免疫器官胸腺的轉(zhuǎn)錄物組進(jìn)行了檢測，并使用健康豬胸腺作為對照。本研究結(jié)果表明，相對正常豬胸腺ＰＣＭＶ感染的胸腺中５５８２種基因發(fā)生顯著差異性表達(dá)，其中２１６１種基因表達(dá)顯著上調(diào)，而３４２１種基因表達(dá)顯著下調(diào)。本研究使用ＰＣＲ對１３種顯實(shí)時(shí)熒光定量著差異性表達(dá)的免疫相關(guān)基因進(jìn)行了檢測，并使用一Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｔｌｏ技術(shù)進(jìn)步對這些基因表達(dá)的蛋白進(jìn)行了驗(yàn)證。對ＰＣＭＶ感染胸腺中差異性表達(dá)基因的基因功能注釋分析（Ｇｅｎｅｏｎｔｏｌｏａｎａｌｙｓｉｓ、基因調(diào)控網(wǎng)絡(luò)分析Ｇｅｎｅｇｙ

6、）（ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｎｅｔｗｏｒｋａｎａｌｙｓｉｓ、及ＫＥＧＧ通路分析結(jié)果均表明，ＰＣＭＶ感染廣泛影響包括）－免疫系統(tǒng)、ＴＧＦＴＮＦ－ａ信號通路在內(nèi)、細(xì)胞代謝過程Ｐ信號通路、淋巴受體信號通路、的大量免疫相關(guān)信號通路。一ＭｉｃｒｏＲＮＡｍＲＮＡ１－２４ｔＲＮＡ。ｉ是種在真核生物中廣泛存在的長度為８ｎ的非編碼（）而成熟ｍｉＲＮＡｓ對發(fā)育、造血作用、細(xì)胞分化、細(xì)胞凋亡、增殖、脂肪代謝、癌癥、信號轉(zhuǎn)導(dǎo)等諸多生命過程都發(fā)揮著重要調(diào)控作用。為了研究ｍｉＲＮＡ在ＰＣＭＶ感染免疫抑制過程中發(fā)揮的調(diào)控功能，本

7、研究利用Ｉｌｌｕｍｉｎａ／Ｓｏｌｅｘａ技術(shù)對感染ＰＣＭＶ的豬肺臟、肝臟、胸腺、腎臟、脾臟及健康豬對應(yīng)器官進(jìn)行高通量測序，并對ｍｉＲＮＡ。、、ＲＮＡ表達(dá)譜進(jìn)行了綜合分析測序結(jié)果顯示，胸腺、肺臟腎臟脾臟及肝臟ｍｉ表達(dá)譜中共發(fā)現(xiàn)６０１種成熟ｍＲＮＡｓ２９５ｉ表達(dá)，其中有種為未錄入ｍｉＲＮＡ數(shù)據(jù)庫的新ｍｉＲＮＡｓ。本ＰＣＭＶ感ｍＮＡ研究從染的多種器官和多種正常器官ｉＲ高通量測序表達(dá)譜－－中挑選１２種ｍｉＲＮＡｓ使用ＳｔｅｍｌｏｏＲＴＰＣＲ檢測手段對其表達(dá)進(jìn)行驗(yàn)證，結(jié)果顯示￥ｐｑ一１２種指定ｍｉＲＮＡ高通量測序與

8、熒光定量ＰＣＲ檢測結(jié)果基本致。基因功能注釋分析（ＧｅｎｅＯｎｔｏｌｏｇｙ，ＧＯ）結(jié)果表明ＰＣＭＶ感染器官中顯著差異性表達(dá)的ｍｉＲＮＡｓ靶基因功能均集中于免疫系統(tǒng)過程（ｉｍｍｕｎｅｓｙｓｔｅｍｐｒｏｃｅｓｓ、細(xì)胞過程（ｃｅｌｌｕｌａｒｒ