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《高脂飲食對模擬低氧環(huán)境sd大鼠主動脈的影響》由會員上傳分享,免費(fèi)在線閱讀,更多相關(guān)內(nèi)容在工程資料-天天文庫。
1、高脂飲食對模擬低氧環(huán)境SD大鼠主動脈的影響趙艷霞張廣梅趙協(xié)慧青海大學(xué)醫(yī)學(xué)院中醫(yī)系,青海西寧810000[摘要]目的研究高脂飲食對模擬低氧環(huán)境SD大鼠主動脈的影響及其可能機(jī)制。方法20只雄性SD大鼠隨機(jī)分為低氧組和低氧聯(lián)合高脂飲食組,普通飲食或高脂飲食,4周后留取外周血及主動脈標(biāo)本,采用TBA比色法檢測血漿丙二醛(MDA)含量、DA含量(4.31±1.10)nmol/mL顯著低于低氧組(P<0.05)。結(jié)論低氧環(huán)境下,高脂飲食加重了SD大鼠主動脈損傷,其機(jī)制可能與抗氧化能力不足及血脂異常引起血漿NOX水平降低有關(guān)。[.jyqk。H+HFD
2、組大鼠灌服脂肪乳劑,10mL/kg/d,1次/d;H組大鼠灌服等體積生理鹽水,普通飲食。于4周末抽取大鼠靜脈血,置于抗凝管,并留取主動脈標(biāo)本于-80℃冰箱保存。1.1.2脂肪乳劑采用前期研究的方法制備脂肪乳劑[3]。1.1.3主要儀器和試劑冷凍離心機(jī)、DU800核酸蛋白儀(德國BECKMAN),低壓氧艙室(貴州風(fēng)雷航空機(jī)械有限公司),丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)及一氧化氮(NO)試劑盒由南京建成生物公司提供,血脂檢測試劑盒、BCA蛋白分析試劑盒、eNOS及β-actin一抗、二抗分別由北京利德曼生化股份有限公司、PierceCh
3、emicalpany、Abcam公司、SantaCruzBiotechnologylnc提供。1.2方法1.2.1主動脈病理形態(tài)觀察取主動脈標(biāo)本固定,脫水,包埋,切片,HE染色,觀察病理形態(tài)改變。1.2.2血漿SOD活力和MDA含量測定于3000r/min離心抗凝血(10min),分離血漿。用DA含量。1.2.3血脂水平檢測采用直接測定法檢測血漿高密度脂蛋白(HDL)和低密度脂蛋白(LDL)含量,采用終點法檢測血漿總膽固醇(TCH)及甘油三酯(TG)含量。1.2.4血漿NOX水平檢測采用硝酸還原酶法檢測血漿NOX水平。1.2.5主動脈eNOS
4、蛋白水平檢測將主動脈切成小塊,裂解組織,勻漿,離心,取上清,檢測樣品總蛋白濃度。用5×蛋白上樣緩沖液于100℃變性5min。采用12%SDS-PAGE電泳分離蛋白。使用半干轉(zhuǎn)印槽將蛋白轉(zhuǎn)印至PVDF膜上。用5%脫脂奶粉在室溫下封閉2h,然后加兔抗eNOS(1:250),β-actin(1:1000),4℃孵育過夜。于洗膜后用辣根過氧化物酶標(biāo)記羊抗兔二抗(1:6000)室溫孵育2h,使用ECL液發(fā)光顯影。膠片掃描后用ImageJ軟件分析,計算目的與內(nèi)參條帶積分光密度值的相對比值。1.3統(tǒng)計學(xué)方法應(yīng)用SPSS17.0統(tǒng)計軟件包,計量資料用(x±s
5、)表示,組間比較采用t檢驗,檢驗水準(zhǔn)α=0.05。2結(jié)果2.1主動脈病理形態(tài)變化H組內(nèi)皮細(xì)胞腫脹,核變圓,局部內(nèi)膜脫落,平滑肌細(xì)胞增生,細(xì)胞核變橢圓,局部胞漿疏松,細(xì)胞輕度排列紊亂;H+HFD組局部內(nèi)膜大片脫落,內(nèi)皮細(xì)胞腫脹,平滑肌細(xì)胞明顯增生,細(xì)胞核變圓,胞漿空泡變明顯,細(xì)胞排列紊亂,見圖1。注:A1A2為H組,B1B2為H+HFD組,A1B1為×100,A2B2為×400。2.2血脂水平檢測H+HFD組LDL、TCH含量明顯高于H組,兩組間的TG與HDL水平無明顯差異,見表1。2.3血漿MDA含量與SOD活力的測定H+HFD組MDA含量與
6、SOD活力均明顯低于H組,見表2。2.4血漿NOx水平測定H+HFD組大鼠血漿NOx含量低于H組,見表2。2.5主動脈eNOS蛋白表達(dá)水平測定H組(0.82±0.15)與H+HFD組(0.91±0.17)大鼠主動脈eNOS蛋白表達(dá)水平無明顯差異(t=-0.885,P=0.402)。3討論本研究通過觀察SD大鼠主動脈病理形態(tài)變化、檢測主動脈eNOS蛋白表達(dá)及血漿NOx含量,探討高脂飲食對模擬低氧環(huán)境機(jī)體主動脈的影響及其機(jī)制。結(jié)果顯示,相對于低氧組,低氧聯(lián)合高脂飲食組主動脈病理損傷加重,eNOS蛋白表達(dá)水平無明顯變化,而血漿NOx含量明顯降低,血
7、漿TCH及LDL明顯升高;低氧聯(lián)合高脂飲食組血漿SOD活力低于低氧組,表明高脂飲食可加重模擬低氧環(huán)境大鼠主動脈的損傷。NO是高原適應(yīng)與習(xí)服的重要指標(biāo)之一,高原世居藏族循環(huán)血NO代謝產(chǎn)物高于低海拔人群的水平,可增加血流灌注及氧傳遞,以抵消低氧影響,而機(jī)體NO含量降低則可引起高原適應(yīng)不良[4-5]。本研究中低氧聯(lián)合高脂飲食組血漿NOx含量明顯低于低氧組,與文獻(xiàn)報道一致[6],即高脂飲食可使模擬低氧環(huán)境SD大鼠血漿NO含量降低,減弱了其對血管的保護(hù)作用,加重了血管內(nèi)皮的損傷,導(dǎo)致內(nèi)膜大片脫落,平滑肌細(xì)胞明顯增生,細(xì)胞核變圓,胞漿空泡變,細(xì)胞排列紊亂
8、。另外,血漿NO含量降低還可影響血管內(nèi)皮細(xì)胞功能,使其釋放擴(kuò)血管物質(zhì)減少,縮血管物質(zhì)增多,進(jìn)而加重了血管收縮與重構(gòu)[7]。提示對于慢性重度低氧性疾病的患者,高脂血癥