西黃丸含藥血清對(duì)人乳腺癌細(xì)胞生長(zhǎng)的影響

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1、西黃丸含藥血清對(duì)人乳腺癌細(xì)胞生長(zhǎng)的影響【關(guān)鍵詞】西黃丸含藥血清人乳腺癌細(xì)胞細(xì)胞周期　　TheEffectsofXihuangPillDrugSerumontheGroanBreastCarcinomaCells　　Abstract：ObjectiveToinvestigatetheeffectsofXihuangpilldrugserumonthegroorcelletry.ResultsXihuangpilldrugserumhadaninhibitoryeffectontherumorcell,content.Typitalmor

2、phologicalchangesofapoptosisissionelectronmicroscope.FCMshofor24h,theratioofcellsinSphaseincreased,ent,theratioofcellsinG0/1phaseincreased,andSphasedecreased.ConclusionXihuangpilldrugserumcaninhibitthegroacell(MCF-7)anditscellcycleinvitro.　　Key；Humanbreastcarcinomacells

3、；Cellcycle西黃丸，又名犀黃丸，方出清—王洪緒所著《外科證治全生集》，為治療“乳巖”“瘰疬”“痰核”“肺癰”之名方［1］。其成分為牛黃、麝香、乳香、沒藥。主要功能為消堅(jiān)化結(jié)、解毒散癰、消腫止痛?，F(xiàn)代主要用于癰疽瘡毒和各種惡性腫瘤的治療。臨床和現(xiàn)代藥理研究［2，3］表明，本方可抑制體內(nèi)外腫瘤的生長(zhǎng)，本研究采用血清藥理學(xué)方法，觀察西黃丸人乳腺癌細(xì)胞增殖的抑制及細(xì)胞周期的作用機(jī)制?！　?材料　　1.1細(xì)胞與細(xì)胞培養(yǎng)人乳腺癌細(xì)胞系（MCF7）由吉林省腫瘤防治研究所提供。接種于含100μ/ml青霉素、100mg/ml鏈霉素和10%胎牛

4、血清的1640培養(yǎng)液中，置于含5%CO2，37℃的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。待細(xì)胞形成單層，常規(guī)消化，收集細(xì)胞，0.5%苔盼藍(lán)染色，其細(xì)胞活性在98%以上?！　?.2含藥血清的制備西黃丸按2g/kg劑量和10ml/kg給藥液體量，將西黃丸用蒸餾水配成相應(yīng)懸液，以SD大鼠6只，按劑量每天灌胃給藥（10ml/kg），連續(xù)7d。于末次給藥后1h（灌胃前禁食12h），以20%烏拉坦，10ml/kg腹腔注射麻醉，腹主動(dòng)脈采血，無菌分離血清，經(jīng)過56℃，30min滅活后，置-80℃冰箱保存?zhèn)溆谩！　?.3試劑、藥品、動(dòng)物1640培養(yǎng)液、胎牛血清、胰蛋白酶購(gòu)自

5、APerstorpLifeSciencespany.PI染色劑，購(gòu)自美國(guó)BD公司，MTT及其它常用試劑購(gòu)自華美公司。CV級(jí)SD大鼠，體重180～220g，雌雄各半。購(gòu)于大連醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，許可證號(hào)SCXK（遼）20020002。西黃丸，九寨溝天然藥業(yè)集團(tuán)有限責(zé)任公司生產(chǎn)，批號(hào)050601。順鉑，德州德藥制藥有限公司生產(chǎn)，批號(hào)050303。　　1.4儀器全自動(dòng)酶標(biāo)儀，流式細(xì)胞儀FACSort，美國(guó)BD公司。　　2方法　　2.1噻唑藍(lán)還原法（MTT）取處于指數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞株配成4×104/ml，加入96孔板，100μl/孔，在37

6、℃，5%CO2條件下培養(yǎng)24h，棄培養(yǎng)液，分別加入2.5%，5%，10%，15%，20%的含藥血清，設(shè)不含藥的血清（血清濃度20%）為陰性對(duì)照組，以0.5mg/ml的順鉑為陽性對(duì)照組，每組5孔，100μl/孔，繼續(xù)培養(yǎng)。培養(yǎng)48h后，用MTT比色法檢測(cè)細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率。即每孔加入MTT溶液20μl（5mg/ml），37℃孵育3h，小心吸去每孔中的培養(yǎng)液，每孔再加入150μl的二甲基亞砜（DMSO），在微型震蕩20min，用全自動(dòng)酶標(biāo)儀測(cè)定各孔OD值。測(cè)定波長(zhǎng)為550nm?！　?.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理運(yùn)用SPSS11.5統(tǒng)計(jì)軟件，利用單因素方差分

7、析比較差異顯著性，所有數(shù)據(jù)均以±s表示?！　?結(jié)果　　3.1含藥血清對(duì)乳腺癌細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制作用含藥血清處理48h，乳腺癌細(xì)胞生長(zhǎng)受到抑制，其作用隨著含藥血清濃度的增加而增強(qiáng)。10%，15%和20%含藥血清組對(duì)細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制明顯高于陰性對(duì)照組（P＜0.01）及2.5%和5%組，其血清濃度與抑制率呈直線相關(guān)。結(jié)果見表1。表1西黃丸含藥血清對(duì)人乳腺癌細(xì)胞（MCF7）生長(zhǎng)的抑制作用(略)　　3.2含藥血清對(duì)細(xì)胞周期的影響對(duì)照組DNA組方圖為典型腫瘤細(xì)胞G0/1，S，G2/M峰型。15%和20%西黃丸含藥血清組處理24h，與陰性對(duì)照組比較，G

8、2M期細(xì)胞減少、S期細(xì)胞比例增加；處理48h，S期細(xì)胞減少，G0/1期細(xì)胞增多。說明西黃丸含藥血清早期主要影響細(xì)胞進(jìn)入G2M期，后期主要使細(xì)胞停滯于G0/1期。因此，可以推斷其作用機(jī)制主要表現(xiàn)在大部分細(xì)胞停滯在DNA合成