安心顆粒對(duì)心衰大鼠血清tnfα、il6及心肌

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1、安心顆粒對(duì)心衰大鼠血清TNFα、IL6及心肌【摘要】　　【目的】觀(guān)察安心顆粒對(duì)慢性心力衰竭（CHF）模型大鼠血清腫瘤壞死因子α（TNFα）、白細(xì)胞介素6（IL6）水平及心肌細(xì)胞凋亡的影響?！痉椒ā繉?0只雌性SD大鼠隨機(jī)分為正常對(duì)照組、模型組、卡托普利組、安心顆粒低劑量組和安心顆粒高劑量組。采用阿霉素腹腔注射造模，每周1次，連續(xù)6周。造模同時(shí)，卡托普利組及安心顆粒低、高劑量組分別按６.２５mg·kg-1·d-1、0.8g·kg-1·d-1、1.6g·kg-1·d-1劑量灌胃給藥。造模結(jié)束后,分別測(cè)定各組血清TNF

2、α、IL6水平與心肌細(xì)胞凋亡指數(shù)（Ｉ凋亡）?！窘Y(jié)果】模型組血清TNFα、IL6水平及Ｉ凋亡均顯著性升高（Ｐ＜０.０５）；安心顆粒低、高劑量組均可顯著性降低模型大鼠血清ＴＮＦα、ＩＬ６水平及Ｉ凋亡（Ｐ＜０.０５或Ｐ＜０.０１），且呈現(xiàn)一定劑量效應(yīng)關(guān)系?！窘Y(jié)論】安心顆?？赏ㄟ^(guò)調(diào)控炎性細(xì)胞因子,抑制心肌細(xì)胞凋亡,阻止心力衰竭的發(fā)展。【關(guān)鍵詞】安心顆粒／藥理學(xué)心力衰竭慢性／中藥療法細(xì)胞凋亡細(xì)胞因子心?。±韺W(xué)疾病模型動(dòng)物大鼠　　研究表明心力衰竭時(shí)有廣泛的心肌細(xì)胞凋亡存在,心肌細(xì)胞凋亡發(fā)生參與了心力衰竭的心肌重塑,并在心力衰竭

3、的發(fā)生、發(fā)展中起重要作用［1］。炎癥細(xì)胞因子可誘導(dǎo)心肌細(xì)胞凋亡、促進(jìn)心肌重構(gòu)而促使心力衰竭惡化［2］。因此，以抑制炎性細(xì)胞因子和心肌細(xì)胞凋亡為靶向的生物學(xué)干預(yù)，是治療心力衰竭的一個(gè)有效途徑。本文旨在通過(guò)建立阿霉素性心力衰竭大鼠模型，探討腫瘤壞死因子α（TNFα）、白細(xì)胞介素6（IL6）與細(xì)胞凋亡的關(guān)系及中藥安心顆粒的作用機(jī)制?，F(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下?！　?材料和方法　　1.1藥物與試劑安心顆粒（由人參、桂枝、瓜蔞殼、水蛭、茯苓等組成，含生藥4.5g/g）由培力（南寧）藥業(yè)有限公司提供（批號(hào)：050301）；卡托普利由中美上海

4、施貴寶制藥有限公司生產(chǎn)（批號(hào)：0505031）；鹽酸阿霉素粉針由深圳萬(wàn)樂(lè)藥業(yè)有限公司生產(chǎn)（批號(hào)：0501E2）。TNFα、IL6試劑盒購(gòu)于北京Solarbio公司；原位細(xì)胞凋亡試劑盒由Roch公司生產(chǎn)。　　1.2動(dòng)物清潔級(jí)雌性SD大鼠50只，體質(zhì)量160～180g，由廣西中醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供（合格證號(hào)為桂醫(yī)動(dòng)字11003）?！　?.3模型復(fù)制［３］將注射用鹽酸阿霉素粉針用滅菌注射用水溶解，用9g/L生理鹽水配成0.8mg/mL溶液，第1～3周按3mg/kg劑量給模型組和用藥組大鼠進(jìn)行腹腔注射，第4～6周再按2mg/kg

5、劑量進(jìn)行腹腔注射，正常對(duì)照組大鼠注射等容積的生理鹽水，均每周1次，連續(xù)6周。以出現(xiàn)心力衰竭病理改變?yōu)樵炷３晒??！　?.4分組及給藥大鼠在用基礎(chǔ)飼料適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后，隨機(jī)分為正常對(duì)照組、模型組、卡托普利組、安心顆粒低劑量組、安心顆粒高劑量組，每組10只，分籠飼養(yǎng)。造模同時(shí)，卡托普利組以6.25mg/kg劑量灌胃，安心顆粒低、高劑量組分別按0.8g/kg和1.6g/kg劑量灌胃，用藥劑量按動(dòng)物體表面積換算。正常對(duì)照組予等容積蒸餾水灌胃。每日1次，自由飲食。　　1.5細(xì)胞因子及心肌細(xì)胞凋亡檢測(cè)末次給藥24h，取大鼠主動(dòng)脈血5mL，分

6、離血清，然后用頸椎脫臼法處死大鼠，剖胸取出心臟，洗凈后切取部分左心室組織，用40g/L多聚甲醛液固定12h，梯度酒精脫水，二甲苯透明，石蠟包埋，切片進(jìn)行形態(tài)學(xué)觀(guān)察。血清細(xì)胞因子TNFα、IL6檢測(cè)：采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附（ELISA）法，嚴(yán)格按試劑盒說(shuō)明操作。心肌細(xì)胞凋亡檢測(cè)：采用TUNEL法，按試劑盒說(shuō)明操作，以細(xì)胞核被染成棕褐色為陽(yáng)性結(jié)果。每個(gè)標(biāo)本觀(guān)察5張切片，每張切片隨機(jī)選取5個(gè)高倍視野（×400）中的凋亡陽(yáng)性細(xì)胞，計(jì)算平均陽(yáng)性細(xì)胞百分?jǐn)?shù)。按公式計(jì)算凋亡指數(shù)：Ｉ凋亡=n凋亡細(xì)胞核/n總細(xì)胞核?！　?.6統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

7、采用SPSS12.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析?！　?結(jié)果　　2.1各組大鼠心肌病理形態(tài)學(xué)觀(guān)察光鏡下觀(guān)察心肌組織切片，正常對(duì)照組大鼠可見(jiàn)心肌形態(tài)正常，胞漿紋理清晰。其他各組可見(jiàn)程度不同的肥大心肌細(xì)胞群，細(xì)胞排列紊亂，斷裂、溶解、炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，卡托普利組及安心顆粒低、高劑量組較模型組改變較輕。模型組還可見(jiàn)肺泡壁破裂、融合、水腫、淤血改變，且肝組織蘇木素-伊紅（HE）染色可見(jiàn)肝竇擴(kuò)張淤血，提示心衰模型制備成功。結(jié)果見(jiàn)圖1?！　?.2各組大鼠血清TNFα、IL6及心肌細(xì)胞凋亡指數(shù)比較在造模過(guò)程中，模型組有3只，卡托普利組及安心顆粒低、

8、高劑量組各有2只大鼠死于心力衰竭，正常對(duì)照組有1只因灌胃不當(dāng)死亡。表1結(jié)果顯示：模型組血清ＴＮＦα、ＩＬ６水平及Ｉ凋亡均顯著性升高（Ｐ＜０.０５），安心顆粒低、高劑量組均可顯著性降低模型大鼠的血清ＴＮＦα、ＩＬ６水平及Ｉ凋亡（Ｐ＜０.０５或Ｐ＜０.０１），且呈一定的劑