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《大鼠被動型heymann腎炎模型建立與抗體劑量關(guān)》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在工程資料-天天文庫。
1、大鼠被動型Heymann腎炎模型建立與抗體劑量關(guān)【摘要】目的：通過對被動型Heymann腎炎模型的建立與抗體劑量關(guān)系的研究，進一步探討膜性腎病的發(fā)病機制。方法：成年雄性SD大鼠分為A、B、C3組，分別經(jīng)尾靜脈注射抗FX1A抗血清1ml/100g、0.5ml/100g以及生理鹽水1ml/100g，1周后檢測24h尿蛋白定量、血清白蛋白、血清肌酐、血清三酰甘油以及總膽固醇，分別在普通光學(xué)顯微鏡和透射電子顯微鏡下觀察大鼠腎組織的病理學(xué)改變。結(jié)果：被動型Heymann腎炎模型的建立與SD大鼠尾靜脈注射抗FX1A抗血清的劑量存在正相關(guān)。結(jié)論：膜性腎病的發(fā)生可能與抗體劑量有關(guān)?！娟P(guān)鍵詞】膜性
2、腎??；被動型Heymann腎炎；過碘酸銀甲胺染色[Abstract]Objective:Toinvestigatetherelationsofantibodydose-responseinpassiveheymannnephritisandtrytoprovidetheevidenceformembranousnephropathyinpathogenesis.Methods:MaleSprague-Dalydividedintothreegroupsand(1ml/100g,0.5ml/100g)andphysiologicalsaline(1ml/100g)indiffere
3、ncethroughcaudalvein.Afteraalbumin,secrumcreatinine,secrumtriglycerideandsecrumtotalcholestorelerularlesionseasuredbylightandelectronicmicroscope.Results:TheSDratsdevelopedthetypicalclinicalandpathologicalpatternsofMNinresponsetoanoptimumdoseofanti-FX1Aserum.Conclusion:MNgenerationmayberelate
4、dbranousnephropathy;PassiveHeymannnephritis；Periodicacidsilvermethanamine膜性腎病(membranousnephropathy,MN)是成人腎病綜合征常見的病理類型之一，但其發(fā)病機理尚未明確。大鼠Heymann腎炎(Heymannnephritis,HN)模型的病理改變及表現(xiàn)與人類膜性腎病十分相似，已作為人類膜性腎病的模型普遍應(yīng)用，其中被動型Heymann腎炎(passiveHeymannnephritis,PHN)系予大鼠直接靜脈注射抗腎小管刷狀緣提取物(Fx1A)的抗體(或抗血清)誘發(fā)，模型較為穩(wěn)定，制備
5、所需時間相對較短，被廣泛用于實驗研究[1]。有關(guān)PHN模型建立過程中Fx1A抗體的劑量反應(yīng)關(guān)系國內(nèi)外報道較少，本研究旨在探討PHN的建立與抗體劑量反應(yīng)的關(guān)系，為膜性腎病發(fā)病機制的實驗研究奠定基礎(chǔ)。1材料和方法1.1實驗動物清潔級健康雄性SD大鼠，體重200~250g，由南通大學(xué)實驗動物中心提供；普通級健康雄性新西蘭大耳兔，體重2.5kg，購自南京金陵種兔場。飼養(yǎng)環(huán)境溫度維持在（20±2）℃，分籠飼養(yǎng)，標(biāo)準飼料，自由攝水，12h交替照明。1.2方法1.2.1Fx1A提取參考Malathi等（1979）方法改良。健康雄性SD大鼠3%戊巴比妥（50mg/kg）腹腔麻醉后于無菌條件下取腎
6、皮質(zhì)，按1∶30（v/mol/L甘露醇/2mmol/LTrisHCl（pH7.0）在冰浴中制成勻漿；加1mol/LCaCl2至終濃度為10mmol/L，4℃3000g離心15min，取上清液，43000g再離心20min，取沉淀用50mmol/L甘露醇/2mmol/LTrisHCl（pH7.0）重復(fù)洗滌1次。重復(fù)上述步驟1次。取沉淀加入0.01mol/LPBS（pH7.4）溶解即為Fx1A，考馬斯亮藍法于600nm波長比色進行蛋白定量。置-20℃冰箱備用。1.2.2Fx1A抗血清的制備與提取將Fx1A溶液與等量完全弗氏佐劑充分乳化后,于新西蘭大耳兔的頸部、背部、腹部以及四肢足墊皮
7、下分點注射，每周1次，共免疫6次。從新西蘭大耳兔耳緣靜脈取血1ml，離心分離血清，用免疫雙向擴散法測定抗血清的效價，達1∶32以上后經(jīng)腹主動脈取血，置57℃水浴30min滅活補體，隨后以5000g離心10min，吸取上清即為Fx1A抗血清，分管置-20℃冰箱備用。1.2.3實驗分組與模型的建立將18只健康雄性SD大鼠按隨機數(shù)字表法分為A、B、C3組，每組6只。A、B、C3組分別經(jīng)尾靜脈一次性注射Fx1A抗血清1ml/100g、0.5ml/100g以及生理鹽水1ml/100g。1.
