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1、大鼠比目魚肌肌梭內(nèi)神經(jīng)末梢的快速銀染方法作者：朱永進(jìn)，樊小力，吳蘇娣，宋新愛【關(guān)鍵詞】快速銀染摘要：目的建立快速穩(wěn)定的肌梭內(nèi)神經(jīng)末梢的銀染方法。方法分離出單一肌梭，對呂榮等人的運(yùn)動終板及神經(jīng)末梢的快速銀染方法做了適當(dāng)?shù)母牧?，用于肌梭?nèi)神經(jīng)末梢的染色。結(jié)果肌梭赤道部與兩極部神經(jīng)末梢呈棕黑色，清晰可見，梭內(nèi)肌纖維染為棕黃色。結(jié)論改良的肌梭內(nèi)神經(jīng)末梢的快速銀染方法，操作簡單，神經(jīng)末梢顯示清晰。 關(guān)鍵詞：肌梭；快速銀染；神經(jīng)末梢 Fastsilverstainingofnerveendingsofmusclespindle
2、inratsoleusmuscle ABSTRACT:ObjectiveToestablishstablesilverstainingmethodforshousclespindleinratssoleusmuscle.MethodsAccordingtoargentaffineofnervefibers,fastsilverstainingorphologyofnerveendingsofisolatedmusclespindleinratssoleusmuscle.ResultsNerveendingsofmus
3、clespindleinequatorialandpolarregionsusclespindleinratssoleusmuscle. KEYusclespindle;fastsilverstaining;nerveendings 肌梭對肌緊張的產(chǎn)生和維持以及對隨意運(yùn)動的精細(xì)調(diào)節(jié)起著至關(guān)重要的作用，肌梭內(nèi)神經(jīng)末梢的病理改變對其生理功能有很大的影響。目前神經(jīng)末梢的銀染方法較多，但其染色時間均較長，且方法不穩(wěn)定。在本研究中，我們對呂榮等人[1]的運(yùn)動終板及神經(jīng)末梢的染色法進(jìn)行了適當(dāng)?shù)男薷模〉昧溯^好的效果，從而為肌梭
4、形態(tài)結(jié)構(gòu)的研究提供了實(shí)驗(yàn)資料。 1材料與方法 1.1實(shí)驗(yàn)動物健康活潑的SpragueDag/kg)，麻醉后，打開胸腔，暴露心臟，經(jīng)左心室插管至主動脈，依次灌流生理鹽水100mL、40g/L多聚甲醛500mL，灌流1.5h以上，至組織呈一定硬度且無血色后，取后肢比目魚肌，并將其置于含有100g/L氯化鈣的10%(體積分?jǐn)?shù))的甲醛溶液，冰箱保存過夜。將固定好的比目魚肌標(biāo)本置于玻璃板上，在雙目解剖顯微鏡下沿肌纖維走行，用分離針仔細(xì)將比目魚肌分離為若干條扁薄的肌片，分別采用聚光燈光源和冷光源為雙目解剖顯微鏡和倒置顯微鏡照亮
5、視野。調(diào)節(jié)雙目解剖顯微鏡的位置，使其焦點(diǎn)與倒置顯微鏡焦點(diǎn)重合，在雙目解剖顯微鏡和倒置顯微鏡下辨認(rèn)肌梭。肌梭與梭外肌呈并聯(lián)關(guān)系，以其呈梭形膨大的赤道部和較強(qiáng)的折光性為辨認(rèn)標(biāo)志。調(diào)整光源的位置，使解剖鏡視野明亮度適宜，便于觀察分離肌梭。用分離針去除肌梭周圍相連的梭外肌纖維、血管等組織，將肌梭完整地分離出來。固定后的肌梭脆性較大，極易損傷，分離時切勿用力牽扯。肌梭在分離過程中盡量保持其形態(tài)的完整和表面的光滑，便于染色。在解剖顯微鏡下，將分離出的肌梭直接貼于經(jīng)鉻釩明膠處理過的載玻片上，并使肌梭平鋪展開?！ ?.3改良的快速銀染
6、方法肌梭標(biāo)本的載玻片自然風(fēng)干后，可依次進(jìn)行以下步驟：80%（體積分?jǐn)?shù)）的乙醇硬化5-6min后，蒸餾水沖洗2遍；50%(體積分?jǐn)?shù))的吡啶酒精，恒溫箱（37℃）2-4h，蒸餾水洗去酒精吡啶液；200g/L硝酸銀37℃孵育1-2h，注意避光；10%(體積分?jǐn)?shù))的中性甲醛溶液浸洗3-4次，直至見不到乳白色液為止；然后用1%(體積分?jǐn)?shù))的中性甲醛溶液洗1、2次；最后蒸餾水沖洗2遍，用濾紙吸干水滴；滴加銀銨溶液2-3滴于載玻片的肌梭標(biāo)本處，迅速顯微鏡下觀察，可有淡淡的棕色，1min內(nèi)將載玻片置入1%(體積分?jǐn)?shù))的中性甲醛溶液，并
7、立即移出，鏡下觀察，至肌梭內(nèi)黑褐色神經(jīng)末梢清晰出現(xiàn)，此時，整個肌梭呈棕黃色；蒸餾水沖洗，入50g/L的硫代硫酸鈉固定1min，常規(guī)酒精梯度脫水，二甲苯透明，樹膠封片?！ ?結(jié)果 2.1單一肌梭整體染色效果肌梭整體呈棕黃色（圖1a），赤道部可見包囊邊界清晰，梭內(nèi)肌淡染為黃色，神經(jīng)末梢為棕黑色，纏繞于梭內(nèi)肌纖維上?！ ?.2肌梭赤道部神經(jīng)纖維肌梭赤道部Ia類傳入纖維（圖1b）呈螺旋狀纏繞于梭內(nèi)肌纖維上，靠近極部的II類纖維呈樹枝狀分布（圖1c）?！ ?.3肌梭極部神經(jīng)纖維肌梭兩極部屬運(yùn)動終末，主要是γ、β運(yùn)動神經(jīng)末梢(圖
8、1d)與梭內(nèi)肌構(gòu)成終板結(jié)構(gòu)（圖中箭頭所示）?！ D1大鼠比目魚肌肌梭內(nèi)神經(jīng)末梢的快速銀染結(jié)果（略） Fig.1Nerveendingsofmusclespindleinsolensmuscleofrats(shousclespindleofrat×100;b:Primarysensorynerveendingsinequator
