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1、茯苓的搖瓶補料發(fā)酵和發(fā)酵罐補料液體發(fā)酵【摘要】 本文在茯苓搖瓶液體發(fā)酵條件研究的基礎(chǔ)上，進一步探討了茯苓的搖瓶補料培養(yǎng)液體發(fā)酵和發(fā)酵罐補料液體發(fā)酵的發(fā)酵工藝。新發(fā)酵工藝縮短了茯苓液體發(fā)酵的時間，并提高了茯苓菌體產(chǎn)量?！娟P(guān)鍵詞】茯苓；液體發(fā)酵；發(fā)酵條件；補料；發(fā)酵罐 ErlenmeyerFlaskAdditionalMediumLiquidFermentationandAdditionalMediumLiquidFermentationinFermentorofPoriaCocosAbstract:Underthestudi
2、esonconditionsofliquidfermentationofPoriacocos,thetechniquesofErlenmeyerflaskadditionalmediumliquidfermentationandadditionalmediumliquidfermentationinfermentoreofPoriacocosliquidfermentationyceliumentation.Keyentation;fermentationconditions;additionalmedium;fermento
3、r茯苓來源于多孔菌科真菌茯苓［Poriacocos(Sch2，121.3℃滅菌20min。1.3.2搖瓶發(fā)酵培養(yǎng)基葡萄糖20g，酵母浸膏3.5g，蛋白胨4.5g，K2HPO41g，MgSO4.7H2O0.5g，初始pH值5.5，蒸餾水1L。1.05kg/cm2，121.3℃滅菌20min。1.3.3搖瓶補料培養(yǎng)基葡萄糖20g，蒸餾水100ml。0.56kg/cm2，112.6℃滅菌30min。1.3.4發(fā)酵罐發(fā)酵培養(yǎng)基葡萄糖100g，酵母浸膏17.5g，蛋白胨22.5g，K2HPO45g，MgSO4.7H2O2.5g，初始pH
4、值5.5，蒸餾水4.05L。1.05kg/cm2，121.3℃滅菌20min。1.3.5發(fā)酵罐補料培養(yǎng)基葡萄糖100g，蒸餾水600mL。0.56kg/cm2，112.6℃滅菌30min。2方法2.1茯苓搖瓶液體發(fā)酵菌種的制備在250ml三角瓶中裝入50ml液體種子培養(yǎng)基，按0.5％的比例接種冷凍甘油菌，25℃搖瓶振蕩培養(yǎng)2d作為液體菌種備用。2.2茯苓搖瓶補料液體發(fā)酵在2L三角瓶裝入360ml液體搖瓶發(fā)酵培養(yǎng)基，以7％的比例接種液體菌種，培養(yǎng)溫度為26℃，培養(yǎng)基初始pH值為5.5，搖瓶轉(zhuǎn)速為150r/min的培養(yǎng)條件下進行搖
5、瓶培養(yǎng)，搖瓶培養(yǎng)時間為7d。在葡萄糖總濃度為4％的條件下，在茯苓液體發(fā)酵的不同培養(yǎng)時間，分別以1%葡萄糖濃度（20ml補料培養(yǎng)基）分兩次補糖或以2%葡萄糖濃度（40ml補料培養(yǎng)基）一次補糖。2.3茯苓發(fā)酵罐液體發(fā)酵菌種的制備在1L三角瓶中裝入350mL液體種子培養(yǎng)基，按0.5％的比例接種冷凍甘油菌，25℃搖瓶振蕩培養(yǎng)2d作為液體菌種備用。2.4茯苓發(fā)酵罐補料液體發(fā)酵在火焰保護下，將350ml發(fā)酵罐種子液接種到發(fā)酵罐內(nèi)。將發(fā)酵溫度設(shè)定為26℃，pH值設(shè)定為5.5，攪拌轉(zhuǎn)速和通氣量根據(jù)溶氧水平的高低而調(diào)整。在葡萄糖總濃度為4％的條
6、件下，在茯苓液體發(fā)酵第48、60、72和84h時，由蠕動泵分四次將0.33%的葡萄糖濃度（100ml補料培養(yǎng)基）或0.67％的葡萄糖濃度（200ml補料培養(yǎng)基）的補料培養(yǎng)基滴加入發(fā)酵罐培養(yǎng)液體內(nèi)。同時，分別考察了不同補料條件下茯苓發(fā)酵罐液體發(fā)酵的最佳發(fā)酵終點。2.5菌絲稱重發(fā)酵液6000r/min離心15min，收集沉積的菌絲球60℃烘干至恒重，用精密天平稱重。3結(jié)果與討論3.1茯苓搖瓶補料液體發(fā)酵以初始葡萄糖濃度為4％，不補糖發(fā)酵為對照。以初始葡萄糖濃度為2％，研究在不同時間補糖和以不同方式補糖對茯苓發(fā)酵水平的影響。從實驗結(jié)
7、果可知（見表1），在發(fā)酵培養(yǎng)第60h和第72h，分別以1%的葡萄糖濃度補糖效果最佳。表1不同時間和不同補料方式對茯苓的搖瓶補料發(fā)酵的影響3.2茯苓搖瓶補料發(fā)酵討論碳源濃度對茯苓液體發(fā)酵的影響較大。初始糖濃度對發(fā)酵有一定的影響，糖濃度過高，將抑制茯苓的生長，但糖濃度過低，由于碳源供應(yīng)不足，也將使茯苓生長受到抑制。茯苓進入對數(shù)生長期后，適當(dāng)補糖可提高茯苓發(fā)酵產(chǎn)量。在不同的培養(yǎng)時間補糖對茯苓生長有一定的影響，補料時間太早，碳源未很好地消耗而不利于茯苓的生長；而補料時間太晚，則又未能及時滿足茯苓生長對碳源的需求。另外，在補糖總量相同的
8、情況下，不同的補糖方式對茯苓生長也有一定的影響，相對于一次以2%的葡萄糖濃度補糖而言，分二次以1%的葡萄糖濃度補糖效果更佳。這也提示發(fā)酵培養(yǎng)基營養(yǎng)成份的相對穩(wěn)定有利于茯苓的生長，最優(yōu)的補糖方式應(yīng)根據(jù)茯苓發(fā)酵過程中碳源消耗速率進行連續(xù)的滴加補料。3.3茯苓發(fā)酵罐補料液體發(fā)酵在茯
