腫瘤患者外周血中抑制性受體lair

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1、腫瘤患者外周血中抑制性受體LAIR:薛江楠,王春艷,張曉姝,曹奇志,宿振國【摘要】  目的:研究LAIR-1在腫瘤患者中的表達,探討其在抗腫瘤免疫應答中的作用。方法:應用夾心ELISA檢測腫瘤患者血清中可溶型sLAIR-1的水平;應用免疫熒光染色和流式細胞術分析,觀察LAIR-1在患者PBMC中NK細胞、CD4+T細胞、CD8+T細胞和B細胞上的表達。結果:腫瘤患者血清sLAIR-1水平為(4.6±3.2)μg/L,明顯高于正常人血清sLAIR-1水平(3.9±3.0)μg/L,P<0.05。NK細胞,CD4+T細胞及CD8+T細胞

2、表達LAIR-1水平上調。肺癌患者CD4/CD8比值明顯低于正常人,B細胞百分率明顯高于正常人。NK細胞、CD4+T細胞CD8+T細胞中LAIR-1的表達陽性率高于對照組。結論:在腫瘤患者LAIR-1分子表達水平高于正常人。腫瘤患者抑制性受體LAIR-1表達水平的上調可能與腫瘤的免疫逃逸有關?!娟P鍵詞】LAIR-1CD305抑制性受體腫瘤  近年來免疫抑制性受體的研究進展迅速,它們在腫瘤免疫應答中的作用日益受到重視。白細胞相關免疫球蛋白樣受體1(leukocyte-associatedimmunoglobulin-likereceptor

3、-1,LAIR-1)為一種免疫抑制性受體,表達于包括T細胞和NK等在內的多種免疫細胞上,并抑制這些細胞的功能[1],2004年在第8屆國際人白細胞分化抗原專題討論會上獲CD305編號[2]。目前國內外還缺乏LAIR-1與腫瘤疾病相關性的研究報道。鑒于T細胞和NK細胞等在人體抗腫瘤免疫應答中發(fā)揮重要作用[3],而LAIR-1能夠廣泛抑制上述免疫細胞的功能,我們采用夾心ELISA法和流式細胞術分別對腫瘤患者血清可溶型LAIR-1(sLAIR-1)水平和外周血淋巴細胞上LAIR-1分子的表達進行了檢測,并對LAIR-1與腫瘤免疫的相關性進行了探

4、討,為進一步了解腫瘤細胞與免疫系統(tǒng)的相互關系提供新的線索,并為腫瘤疾病的免疫治療提供依據?! ?材料和方法  1.1材料FITC標記的單克隆抗體(mAb)FMU-LAIR1.1和sLAIR-1夾心ELISA檢測試劑盒由第四軍醫(yī)大學免疫學教研室制備[4]。RPMI1640培養(yǎng)基為美國Gibco公司產品,小牛血清(FCS)購自杭州四季青生物材料公司。PE、FITC或PE/Cy5標記的小鼠抗人CD3、CD4、CD8、CD19、CD56和同型對照mAb購自晶美公司。腫瘤患者33例,男20例,女13例,經活檢病理診斷確診,年齡17~50(平均45.

5、6)歲。30例正常人為健康體檢者,男13例,女17例,年齡17~19(平均18)歲。血清由濱州醫(yī)學院附屬醫(yī)院檢驗科及第四軍醫(yī)大學西京醫(yī)院協(xié)助收集。  1.2方法  1.2.1血清標本采集患者血清于治療及手術前采集,室溫下靜置30min后,2000r/min離心10min,取血清,置-20℃冰箱保存。  1.2.2sLAIR-1的檢測夾心法ELISA檢測sLAIR-1檢測方法由第四軍醫(yī)大學免疫學教研室建立,按常規(guī)方法檢測[4]?! ?.2.3流式細胞術分析無菌抽取正常人和腫瘤患者外周血,肝素抗凝,Ficoll密度梯度法分離PBMC,100m

6、L/LFCSRPMI1640培養(yǎng)基重懸。用PE、FITC或PE/Cy5標記的小鼠抗人CD3、CD4、CD8、CD19和CD56mAb進行膜表面熒光標記,流式細胞術檢測?! ?.2.4統(tǒng)計學處理采用SPSS10.0軟件進行數據分析,數據以x±s表示,計量資料均數比較采用方差分析。  2結果  2.1sLAIR-1在腫瘤患者和健康人血清中的水平共檢測33例腫瘤疾病患者和30例健康人血清中sLAIR-1的水平。腫瘤患者血清sLAIR-1的水平為(4.6±3.2)μg/L,明顯高于正常人血清sLAIR-1水平(3.9±3.0)μg/L,P<

7、0.05)?! D1正常人與腫瘤患者血清LAIR-1水平的比較(略)  Fig1parisonsofserumsLAIR-1levelsbetor  2.2LAIR-1在腫瘤患者和健康人外周血NK細胞、CD4+T細胞、CD8+T細胞和B細胞上的表達檢測了5例癌癥患者和5例健康人外周血NK細胞、CD4+T細胞、CD8+T細胞和B細胞上的表達。其中肺癌患者3例,膽管癌和胃癌各1例。發(fā)現2例肺癌患者中CD4和CD8陽性細胞的百分率分別17.5%和45.8%,CD4/CD8為比值明顯低于正常人,但CD4+T細胞和CD8+T細胞中LAIR-1表達百

8、分率均也有所升高。同時在B細胞和NK細胞中也觀察到LAIR-1明顯升高的現象?! 〖毎庖咴跈C體的抗腫瘤免疫中發(fā)揮重要作用。參與抗腫瘤免疫的細胞包括NK細胞、NKT細胞、γδT細胞、T細胞、巨

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